2001 Fiscal Year Annual Research Report
新規細胞内カルシウム結合蛋白質peflinの機能解析
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11460038
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
牧 正敏 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (40183610)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柴田 秀樹 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助手 (30314470)
人見 清隆 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助教授 (00202276)
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| Keywords | カルシウム結合タンパク質 / penta-EF-hand / ALG-2 / peflin / 相互作用 / ヘテロダイマー / アポトーシス |
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| Research Abstract |
我々は、カルパインやALG-2と同様に5つのEF-handをもつタンパク質としてpeflinを発見したが、特異抗体を作製して生化学的解析を行ない、peflinがALG-2とヘテロダイマーを形成していることを明らかにした。そこで、両者の結合部位を推定するため、ALG-2との相互作用を酵母two-hybrid法により解析した。その結果、EF-4/5がダイマー形成部位であることが判明した。さらに、ヒト胚性腎細胞HEK293にトランスフェクションして発現解析を行ったところ、ともにEF-5欠損体は半減期が著しく短く、培地中にプロテアソーム阻害剤を添加することによって検出が可能となった。EF-5はダイマー形成に必須であり、peflinおよびALG-2はダイマーを形成することにより、蛋白質の折りたたみが正確に起こり、安定化すると考えられる。一方、peflinの新規相互作用因子を探索するため、HeLa cDNAライブラリーを用いて酵母two-hybrid法によるスクリーニングを行ったが、ALG-2が陽性クローンとして得られた。その他のクローンは、種々の判定基準から擬陽性と判断された。peflinとALG-2がヘテロダイマーを形成していることから、両者を同時に発現させたthree-hybrid法を構築して探索する必要があると思われる。一方、ALG-2を'bait'にして同ライブラリーを探索した結果、peflinとともに、既にその相互作用因子として報告されているAlixが陽性クローンとして得られた。現在、さらに新規相互作用因子としての可能性がある2つのクローンについて解析中である。ひとつはアネキシンXI、他は、ヒトゲノムデータベース上で機能未知となっており、今後の展開が期待される。
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[Publications] Y. Kitaura 他4名: "Peflin and ALG-2, Members of the Penta-EF-hand Protein Family, Form a Heterodimer that Dissociates in a Ca^<2+>-dependent Manner"Journal of Biological Chemistry. 276. 14053-14058 (2001)
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[Publications] S. Ohkouchi 他5名: "Identification and Characterization of Two Penta-EF-hand Ca^<2+>-binding Proteins in Dictyostelium discoideum"Journal of Biochemistry. 130. 207-215 (2001)
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[Publications] K. Hitomi 他4名: "Analysis of Epidermal-type Transglutaminase(TGase 3)Expression in Mouse Tissues and Cell Lines"International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 33. 491-498 (2001)
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[Publications] A. Ruiz-Vela 他6名: "Transplanted Long-term Cultured Pre-BI Cells Expressing Calpastatin Are Resistant to B Cell Receptor-induced Apoptosis"Journal of Experimental Medicine. 194. 247-254 (2001)
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[Publications] Y. Kitaura 他4名: "Both ALG-2 and Peflin, Penta-EF-hand(PEF)Proteins, Are Stabilized by Dimerization through Their Fifth EF-hand Regions"Archives of Biochemistry and Biophysics. (印刷中). (2002)
