生殖細胞の選択的死滅制御機構の解明とその人為的支配

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11460127
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 宮本 元 京都大学, 農学研究科, 教授 (00026618)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 杉本 実紀 京都大学, 農学研究科, 助手 (20243074) ; 眞鍋 昇 京都大学, 農学研究科, 助教授 (80243070)
• Keywords: 卵巣 / 卵胞 / 顆粒層細胞 / 哺乳類 / アポトーシス / 細胞死受容体 / モノクローナル抗体 / プログラム細胞死

Research Abstract

哺乳類においては、99.9%以上を卵胞閉鎖による選択的死滅に誘導し、ごくわずかの卵胞を選抜して排卵させる機構が存在する。この卵胞の選択は優良な子孫のみを後代に残して繁栄するためのkey phenomenonであるので、この分子機構を解明するべく本研究を行った。すなわち、穎粒層細胞の表面に発現しているアポトーシス受容体分子の制御機構の解明を進め、下記のように、穎粒層細胞特異的細胞死受容体の発見とそのシグナル伝達系解明の賭を得た。(1)卵胞を構成する内外卵胞膜細胞、穎粒層細胞、卵丘細胞、卵母細胞を顕微鏡下に精密の分離できるブタ卵胞を材料として用い、卵胞退行に伴って穎粒層細胞に特異的に発現するmRNAを検出・同定するため、健常(卵胞外より卵子-卵丘細胞複合体が視認可)と退行(視認不可)卵胞由来の卵母、卵丘、穎粒層細胞のライブラリーを利用して、サブトラクション-PCR法にて退行卵胞に特異的なmRNAを増幅・同定し、チロシンキナーゼドメインをもつ血小板由来成長因子様の細胞分化制御因子を見いだした。(2)健常卵胞から調整した穎粒層細胞を抗原として感作して細胞膜結合性の糖蛋白質と糖鎖構造特に細胞膜表面に発現する穎粒層細胞特異的細胞死受容体分子を検索するため、標的分子を認識・検出できるモノクロナール抗体を作成できた。このモノクロナール抗体が認識する腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーに属する分子量55kDの新規細胞死受容体を同定した。この細胞死受容体は、肝、腎、脳などの卵巣以外の組織には発現していない、穎粒層細胞特異的に発現しているもので、FasやTNF受容体などの既知細胞死受容体とは異なる新規なものであることを証明できた。

Research Products

• [Publications] Noboru Manabe, Hajime Miyamoto et al.: "In vivo noninvasive nuclear magnetic resonance (NMR) technique for assessment of teratogenicity induced by chemicals"Chemical Engineering. 47・1. 110-114 (2002)
• [Publications] Satoko Wada, Noboru Manabe, Hajime Miyamoto et al.: "TRAIL-decoy receptor-1 disappears in granulosa cells of atretic follicles in porcine ovaries"Journal of Reproduction and Devevelopment. 48・2. 167-173 (2002)
• [Publications] Satoko Wada, Noboru Manabe, Hajime Miyamoto et al.: "TRADD is involved in apoptosis induction in granulosa cells during atresia in pig ovaries"Journal of Reproduction and Devevelopment. 48・2. 175-181 (2002)
• [Publications] Hitoshi Okamura, Noboru Manabe et al.: "Protein tyrosine kinase expression in the porcine ovary"Molecular Human Reproduction. 7・4. 723-729 (2001)
• [Publications] Eiichi Hondo, Noboru Manabe et al.: "Molecular cloning and expression of suppressor of potassium transport defect 3 (SKD3) in rat testis"Journal of Reproduction and Devevelopment. 47・2. 173-180 (2001)
• [Publications] Minako Kiso, Noboru Manabe, Hajime Miyamoto et al.: "Abnormal accumulation of luteal bodies in ovaries of the senescence accelerated mouse (SAM)"Journal of Reproduction and Devevelopment. 47・2. 153-164 (2001)
• [Publications] Mizuho Nakayama, Noboru Manabe, Hajime Miyamoto et al.: "Changes in localization of type I, III and IV collagens and their mRNA expression during follicular atresia in bovine and porcine ovaries"Journal of Reproduction and Devevelopment. 47・1. 27-36 (2001)
• [Publications] Noboru Manabe, Hajime Miyamoto et al.: "Cell death receptor dependent regulation of granulosa cell apoptosis in porcine ovarian follicle atresia. In : Miyamoto H, Manabe N (eds), Reproductive Biotechnology : Reproductive biotechnology update and its related physiology"Hokuto Publishing Co., (Kyoto, Japan). 424 (2001)