ゲノムインプリントを受けた染色体領域のクロマチン凝縮の解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11470033
• Research Institution: NIIGATA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 木南 凌 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (40133615)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 三嶋 行雄 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (30166003)
• Keywords: ゲノムインプリント / 内部欠失 / 欠失領域 / クロマチン凝縮度 / 臓器特異的発見

Research Abstract

ゲノムインプリントされる染色体領域の凝縮度を比較測定するために開発した、クロマチン凝縮測定法(H/Eアッセイ法)を用い、本年度はRit1がん抑制遺伝子領域の染色体凝縮度を検討した。マウス放射線誘発胸腺リンパ腫でRit1は高頻度のHomozygous deletionを示す。この欠失した領域を測定すると、Rit1遺伝子のエクソン2とエクソン3の領域に限定されている例が多数見られる。すなわち、20-50kb領域の内部欠失が起こっている。この結果から、欠失領域は核内でループ構造をとり、再結合する配列はループの根本で接近し、しかも開かれたクロマチン構造をとっていると想像される。そこで、BALB/cマウスの胸腺、脳および肝臓から核を分離し、その核分画を超音波処理し、ヘテロおよびユウクロマチンに分画した。それぞれのDNAを一定量のMSMマウスDNAと混合し、多型マーカーを用いてRit1近傍領域のクロマチン凝縮度を調べた。用いたプローブは合計8種類で、Rit1遺伝子領域とその両側を含むものである。H/Eアッセイの結果、胸腺および脳では、Rit1近傍から広範囲にわたってユウクロマチン優位のゆるい濃縮度を示した。それに対し、肝臓ではRit1近傍はユウクロマチン優位であるが、内部欠失領域から離れるに従ってヘテロクロマチン優位のつよい凝縮度を示した。Rit1遺伝子は胸腺と脳では転写されているが、肝臓では発現が見られない。従って、臓器特異的な発現と染色体凝縮度との関連性が示唆されたことになる。一方、Rit1内部欠失の配列を決定し、組換えのホットスポットを同定した。このホットスポットを含め、Rit1遺伝子内部での詳細なクロマチン凝縮解析を行うために、現在BALB/cマウスとMSMマウス間での多型を探索しているところである。

Research Products

• [Publications] Kazunori Shiraishi: "Persistent induction of somatic reversions of the pick-eyed unstable mutation in F1 mice born to fathers irradiated at the spermatozoa stage"Radiation Research. in press. (2002)
• [Publications] Akira Yoshimura: "Mononucleosomes Assembled on a DNA Fragment Containing (GGA/TCC)(n) Repeats Can Form a DNA-DNA Complex"Biochemical Biophysical Research Communications. 290. 16-22 (2002)
• [Publications] Ryo Kominami: "Genetic analysis of radiation-induced thymic lymphoma"International Congress Series. 715. 224-231 (2001)
• [Publications] Yuko Saito: "Genetic loci controlling susceptibility to r-ray-induced thymic lymphoma"Oncogene. 20. 5243-5247 (2001)
• [Publications] Tadashi Wada: "A Point Mutation in a Cadherin Gene, Cdh23, Causes Deafness in a Novel Mutant, Waltzer Mouse Niigata"Biochem. and Biophy. Res. Comm.. 283. 113-117 (2001)