1999 Fiscal Year Annual Research Report
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11470134
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kochi Medical School |
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Principal Investigator |
西森 功 高知医科大学, 医学部, 助手 (30237747)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
米澤 傑 鹿児島大学, 医学部, 教授 (10175002)
田口 尚弘 高知医科大学, 医学部, 助手 (80127943)
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| Keywords | 炭酸脱水酵素 / 膵臓 / 遺伝子クローニング / ミトコンドリア / 膜貫通蛋白 / CAVB / CA-RP Xl / CAXlV |
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| Research Abstract |
ヒト膵臓においてCAIV/VIのmessage発現を確認した。また、新しいCAアイソザイムの遺伝子クローニングを行い、下記のごとく生化学的特徴、細胞内局在、組織分布、染色体座について検討を行った。
CAVB:ミトコンドリアCAVAと最も高い相同性を示し、317アミノ酸をコードする1182塩基対のcDNAをクローニングした。COS-7細胞のミトコンドリア分画に遺伝子組み換え蛋白の発現が確認され、得られたクローンは新しいミトコンドリアCAと考えられた。CAVB蛋白はN末端に33アミノ酸残基のシグナル配列をもち、Western blot法による検討で前駆蛋白および成熟蛋白の分子量は各々36kDa、32kDaであった。弱いCA活性が認められた。遺伝子座はXp22.1であった。mRNAの発現検討ではCAVAが肝臓でのみ発現されるのに対し、CAVBは肝臓以外の主要臓器での発現がみられた。
CA-RPXI:328アミノ酸をコードする1475塩基対のcDNAをクローニングした。予想分子量は36.2kDaであり、既報のCAアイソザイムと42-53%の相同性を示した。しかし、亜鉛結合部位である3つのHis残基を決失していることより、活性のないCAと考えられた。Northern blot法では1.5kbのmessageがヒト脳に認められたが、膵臓での発現は認められなかった。一方、RT-PCR法では膵臓をはじめ主要臓器でのmessage発現が認められた。遺伝子座は19q13.2-3であった。
CAXIV:膜貫通I型蛋白であるCAXIIと最も高い相同性を示し、337アミノ酸をコードする1757塩基対のcDNAをクローニングした。予想分子量は37.6kDaであった。CAXIIと同様、CAXIV蛋白はN末端にシグナル配列、C末端側に膜貫通ドメインを有していた。CAXIV蛋白には弱いCA活性が認められた。Northern blot法で1.7kbのmessageがヒト心、脳、肝、骨格筋において認められたが、膵臓での発現は認められなかった。一方、RT-PCR法では膵臓でCAXIIの発現が認められ、CAXII/XIVは各臓器で相補的に発現している事が示された。遣伝子座は1q21であった。
現在、部分cDNA配列のみ報告されているCAXをクローニングしている。また、膵臓における蛋白発現の検討を行うため、各アイソザイムに対する特異抗体を作製中である。
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[Publications] Kiyomi Fujikawa-Adachi: "Identification of carbonic anhydrase IV and VI mRNA exoression in human pancreas and salivary glands."Pancreas. 18・4. 329-335 (1999)
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[Publications] Kiyomi Fujikawa-Adachi: "Human carbonic anhydrase XIV:cDNA cloning,mRNA expression,and mapping to chromosome 1."Genomics. 61・1. 74-81 (1999)
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[Publications] Kiyomi Fujikawa-Adachi: "Human mitochonddrial carbonic anhydress VB: cDNA cloning.mRNA expression,subcellular localization,and mapping to chromosome X."Journal of Biological Chemistry. 274・30. 21228-21233 (1999)
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[Publications] Kiyomi Fujikawa-Adachi: "cDNA sequence,mRNA expression,and chromosomal localization of human carbonic anhydrase-related protein,CA XI."Biochimica et Biophysaca Acta. 1431. 518-524 (1999)
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[Publications] Naoaki Akisawa: "The ability of anti-carbonic anhydrase ll anibody to distinguish autoimmune cholangitis from primary biliary cirrhosis in Japanese patients."Journal of Gastroenterol. 34. 366-371 (1999)
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[Publications] Isao Nishimori: "carbonic anhydrase in the human pancreas:hypotheses for the pathophysiological roles of CA isozymes."Annals of the New York Acaddemy of Science. 880. 5-16 (1999)
