1999 Fiscal Year Annual Research Report
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11470145
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
下濱 俊 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (60235687)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
赤池 昭紀 京都大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (80135558)
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| Keywords | 家族性筋萎縮性側索硬化症 / ALS / Cu / Zn superoxide dismutase(SOD-I) / グリア / 野生株 / 変異SOD-1 / 増殖 / 酸化ストレス |
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| Research Abstract |
近年家族性筋萎縮性側索硬化症(FALS)の原因遺伝子としてCu/Zn superoxide dismutase(SOD-1)が同定されたが、その病態機序については依然不明である。一方患者組織やtransgenic moseを用いた検討で、細胞内封入体の出現等グリア細胞に比較的早期より変化がみられ、グリア細胞の機能異常がその病態生理に関与する可能性が指摘されている。今回我々は培養グリア細胞におけるFALS関連変異SOD-1の効果について検討を行った。健常人白血球total RNAよりRT-PCR法にて、全長を含んだヒト野生型SOD-1のcDNAを分離し、変異導入法にて既存の2つの変異体(A4V、G85R)を作製した。シークエンスにて確認後、野生型及びA4V、G85R、SOD-1を発現ベクターに組み込み、リポフェクチン法にて培養グリア細胞(C6細胞)に導入した。発現の確認のため、SOD-1の3末端にFLAGエピトープを組み込み、抗FLAG抗体を用いたウエスタンブロット法にて検討した。さらに発現ベクターに組み込まれたネオマイシン耐性遺伝子を利用して持続導入株の選択をおこなった。過酸化水素や一酸化窒素放出剤の負荷、細胞内グルタチオンの除去等の酸化ストレスに対する抵抗性には、野生株導入細胞と変異SOD-1導入細胞には有意の差はみられなかった。一方、導入グリア細胞より調整したconditioned mediaの神経系細胞株(SHSY5Y)への増殖刺激効果は、変異導入細胞にて低い傾向が観察された。以上の結果からは、変異SOD-1はグリア細胞に明らかな毒性を示さないが、増殖因子の産生等グリア細胞の機能変化をもたらす可能性が示唆された。
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[Publications] Kawasaki H.et al.: "Requirement for mitogen-activated protein kinase in cerebellor long term depression"Journal of Biological Chemistry. 274. 13498-13502 (1999)
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[Publications] Shinohama S.et al.: "Changes in caspase expression in Alzheimer's disease: comparison with development and aging"Biochemical and Biophysical Research Communications. 256. 381-384 (1999)
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[Publications] Imura T.et al.: "Differential Expression of small heat shock proteins in reactive astrocytes after focal ischemia: Possible role of beta advenergic receptor"Journal of Neuroscience. 19. 9768-9779 (1999)
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[Publications] Imura T.et al.: "Selective induction of glial glutamate transporter GLT-1 by hypertonic stress in C6 glioma cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. 265. 240-245 (1999)
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[Publications] Sawada H.et al: "Neuroprotective mechanism of glial cell line-derived neurotrophic factor in mesencephalic neurons"Journal of Neurochemistry. 74. 1175-1184 (2000)
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[Publications] Sawada H.et al: "Mechanism of antiapoptotic effects of estrogen in nigral dopaminergic neurons"FASEB.Journal. (in press). (2000)
