レーザーマイクロダイセクションを用いたCAGリピートの不安定化機構の研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11470148
• Research Institution: Jichi Medical School
• Principal Investigator: 瀧山 嘉久 自治医科大学, 医学部, 講師 (00245052)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 滑川 道人 自治医科大学, 医学部, 助手 ; 嶋崎 晴雄 自治医科大学, 医学部, 助手 (30316517) ; 西澤 正豊 国際医療福祉大学, 教授 (80198457)
• Keywords: レーザーマイクロダイセクション / CAGリピート / meiotic instability / mitotic instability / MJD / SCA6 / 臍帯血 / Huntington病

Research Abstract

Meiotic instabilityについては,(1)Huntington病(HD)exon 1のreplacement mouse(homozygote)の精祖細胞・精母細胞・精子細胞・精子の単一細胞群をlaser-captured microdissection(LCM)を用いて単離して,CAGリピート数の解析を行った.解析に用いたmouseではCAGリピート数は細胞が分化するにつれて減少する傾向にあり,精子細胞は精母細胞に比べて有意にリピート数が減少することが判明した(Mann-Whitney U test,P<0.05).CAGリピート数の分散値は,精祖細胞と精母細胞、精祖細胞と精子細胞の間で有意に小さくなっていた(F-test,P<0.05).(2)spinocerebellar ataxia type6(SCA6)家系において,20リピートが26リピートに,19リピートが20リピートに増大した例(denovo expansion)を見出し,これまで世代間でCAGリピートは安定していると考えられていたSCA6においても,比較的長い正常リピートは病的範囲に増大しうることをはじめて直接示した.Mitotic instabilityについては,(1)LCMを用いてMachado-Joseph病(MJD)患者2例の小脳皮質(分子層,Purkinje細胞層,顆粒層),白質の各単一細胞群のCAGリピート数の解析を行った.2例とも皮質は白質に比し有意にリピート数は小さく(Mann-Whitney U test,P<0.005-0.05),小脳皮質各細胞層間でのリピート数の有意差は認められなかったが,Purkinje細胞層の分散値は大きい傾向にあった.
(2)MJD・HD患者の保存臍帯を用い,臍帯血と23年後(MJD),37年後(HD)の末梢血のCAGリピートのmosaisismを比較検討した.その結果,CAGリピート病の血液細胞のmosaicismは,時間経過とともに有意に増大することをはじめて示した(Mann-Whitney U test,P<0.005).

Research Products

• [Publications] Yamashita I: "A novel locus for dominant cerebellar ataxia (SCA14) maps to a 10.2-cM interval flanked by D19S206 and D19S605 on chromosome 19q13.4-qter."Ann Neurol. 48・2. 156-163 (2000)
• [Publications] Shimohata T: "Expanded polyglutamine stretches interact with TAF_<II> 130, interfering with CREB-dependent transcription."Nature Genet. 26・1. 29-36 (2000)
• [Publications] Yabe I: "Predisposing chromosome of spinocerebellar ataxia type 6 (SCA6) in Japanese."J Med Genet. (in press).
• [Publications] Zhou YX: "Spinocerebellar ataxia type 1 in China : molecular analysis and genotype-phenotype correlation in five families."Arch Neurol. (in press).
• [Publications] Shimazaki H: "Meiotic instability of the CAG repeats in the SCA6/CACNAIA gene in two Japanese SCA6 families."J Neurol Sci. (in press).
• [Publications] Namekawa M: "A large Japanese SPG4 family with a novel insertion mutation of the SPG4 gene : a clinical and genetic study."J Neurol Sci. (in press).
• [Publications] 法化図陽一: "Spinocerebellar ataxia type6(SCA6)の一家系:その臨床徴候を主体に."臨床神経. (印刷中).
• [Publications] 滝山嘉久: "遺伝性神経筋疾患の最新情報:Machado-Joseph病"内科. (印刷中).