2000 Fiscal Year Annual Research Report
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11470159
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| Research Institution | University of Tokyo |
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Principal Investigator |
高橋 利之 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40236302)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
八尾 厚史 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
原田 和昌 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
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| Keywords | 心筋虚血・再灌流 / RT-PCR法 / RACE法 / ニワトリ胚 / 心筋細胞 / hypoxia-inducible factor 1α / endothelial PAS protein 1 / cDNA クローニング |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、虚血・再灌流心筋における転写因子hypoxia-inducible factor 1α(HIF-1α)の発現並びに機能的意義を明らかにすることであった。本年度は主に、ニワトリHIF-1αの構造について検討を加え、さらに、ニワトリ胚組織におけるその発現パターンを解析した。
1)ニワトリ胚におけるHIF-1α cDNAのクローニングと発現解析:RT-PCR法およびRACE法を用いて10日目ニワトリ胚由来培養心室筋細胞(CEVM)より単離に成功したニワトリHIF-1α cDNAについて種々の解析を加えた。ニワトリHIF-1αのアミノ酸配列はヒトHIF-1αと高い相同性(約79%)を示しており、特に、basic helix-loop-helix(bHLH)ドメイン、Per/ARNT/Sim(PAS)ドメイン、3'転写活性化ドメインにおける相同性が高かった。中でも、PAS(B)ドメインの相同性は100%であり、この部位がHIF-1αの機能発現に本質的役割を果たしている可能性が示唆された。他方、ニワトリHIF-1αと他のbHLH-PAS蛋白であるニワトリendothelial PAS protein1(EPAS1)との間のアミノ酸配列の相同性は約49%と低く、これら二つの蛋白質が進化の早期に分岐したことを示唆している。HIF-1α mRNAの発現レベルに関しては、CEVM、ニワトリ胚心臓において高く、ニワトリ胚肝臓で低かった。それに対し、EPAS1 mRNAの発現レベルは、ニワトリ胚肝臓で高く、CEVM、ニワトリ胚心臓において低かった。以上より、HIF-1αが胎生期心血管系の発達に寄与している可能性が示唆された(Takahashi T,et al.Biochem Biophys Res Commun,2001,in press)。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Sugishita Y,Takahashi T,Shimizu T, et al.: "Expression of genes encoding vascular endothelial growth factor and its Flk-1 receptor in the chick embryonic heart."J Mol Cell Cardiol. 32. 1039-1051 (2000)
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[Publications] Takahashi T,Sugishita Y,Nojiri T, et al.: "Cloning of hypoxia-inducible factor 1α cDNA from chick embryonic ventricular myocytes."Biochem Biophys Res Commun. (印刷中). (2001)
