ヒト血液凝固第XIII因子の生合成と放出の機構の分子、細胞及び個体レベルでの解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11470205
• Research Institution: Yamagata University
• Principal Investigator: 一瀬 白帝 山形大学, 医学部, 教授 (10241689)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小関 しおり 山形大学, 医学部, 助手 (70312741) ; 惣宇利 正善 山形大学, 医学部, 講師 (20292419)
• Keywords: トランスグルタミナーゼ / 遺伝子発現 / 放出機構 / 遺伝子ノックアウト / マウスゲノム / XIII因子欠損症

Research Abstract

1)内因性にXIII因子Aサブユニット(XIIIA)を産生する巨核球系、単球系細胞株を培養して観察したところ、細胞内のXIIIAタンパク質は培養日数ととも増加し、継代を重ねることによっても発現量が増加した。
2)各種の分化・増殖の刺激によっても発現量は変動するが、その際XIIIA遺伝子のcis-elementへの一部の転写因子の結合量の変化が認められた。
3)XIIIAの細胞内局在を、遠心分画法や蛍光免疫組織学的方法にて観察したところ、最初サイトゾルに分散した染色パターンが、時間の経過とともにフィラメント様構造および核様染色パターンに変化するなど、細胞内での存在様式の大きな変化が見られた。
4)混合実験により、XIIIAはXIII因子Bサブユニット(XIIIB)と複合体を形成すること、それにより安定化されることが確認された。
5)マウスXIIIB遺伝子をノックアウトするためのベクターをES細胞に導入し、相同組換えによって2つのノックアウト細胞株を選択することができた。
6)上記のES細胞から17匹のキメラマウスが得られたので、C57BL/6と交配すると65匹のF1マウスが得られ、現在、genotypeを解析中である。
7)XIIIA遺伝子をノックアウトするためのベクターを数種類作製してES細胞に導入し、延べ2000クローン以上スクリーニングしたが、確かな陽性細胞は得られていない。そこで、標的とする部位を変えた新しいベクターを作製し、現在、相同組換え陽性のES細胞を選択中である。

Research Products

• [Publications] Akitada Ichinose: "Hyper-Lipoprotein(a)-emia, Atherosclerosis, and Thrombosis."Acta Gerontologica . 49(1/2). 29-36 (1999)
• [Publications] Akitada Ichinose: "Molecular and genetic mechanisms for factor XIII A subunit deficiency."Semin.Thromb.Hemost.. 26(1). 5-10 (2000)
• [Publications] Shiori Koseki: "Truncated Mutant B Subunit for Factor XIII Causes its Deficiency due to Impaired Intracellular Transportation."Blood. 97(9)(in press). (2001)
• [Publications] Masayoshi Souri: "Novel Y283C Mutation of the A Subunit for Coagulation Factor XIII : Molecular Modeling Predicts its Impaired Protein Folding and Dimer …"Brit.J.Haematol.. (in press). (2001)
• [Publications] Dominic C.Chung : "Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th Ed."McGraw-Hill Book Company. 21 (2001)