血栓症の成因と病態、とくに血液凝固とその制御機構障害への分子生物学的アプローチ

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11470250
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 松田 道生 自治医科大学, 医学部, 教授 (50048980)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 三室 淳 自治医科大学, 医学部, 講師 (10221607) ; 諏合 輝子 自治医科大学, 医学部, 講師 (60183844) ; 坂田 洋一 自治医科大学, 医学部, 助教授 (40129028) ; 窓岩 清治 自治医科大学, 医学部, 講師 (70296119)
• Keywords: フィブリノゲン / 遺伝性異常フィブリノゲン / 点変異 / 余剰糖鎖 / 血栓性素因 / 電顕学的分析 / フィブリンの超微細構造 / 抗フィブリノゲン・モノクロナル抗体

Research Abstract

前回の科研費補助金 (基盤研究 A 08407034) により分析を開始した幾つかの異常 fibrinogen (Fbg)で新知見が得られた (研究業績2,5-7,11)。中でも Fbg Marburg では rotary shadow 法電顕により異常Aα鎖に結合した血清 albumin を証明した。また、走査電顕では形成された fibrin (Fbn) 線維がきわめて細く、これらが密に網状構造を形成していた (研究業績7)。水の透過性低下 (Blood 91:3282,1998) と共に血栓症の素因となったと結論した。
Fbg Niigate では新たな型の点変異BβAsn 160 → Ser が同定され、このため Asn-X-Ser 型の糖付加構造が形成され、付加された余剰糖鎖が Fbg 原線維から Fbg 束形成への道程を障害し、 Fbg ゲル形成を遅延させていることを生化学的および電顕学的手法で証明し、国外の共同研究者 Mosesson 教授らと共に国際誌Blood (研究業績7) に報告した。
Fbg Osaka VIではBβ鎖遺伝子の停止コドン (TAA) が Lys をコードする (AAA) に変じており、このため、Bβ鎖C末に12アミノ酸残基が余剰に付加されていた。このC末から第2位は Cys で他の分子の同位の CysとS-S結合していることを電顕学的に証明し、第17回国際血栓止血学会 (Washington D.C.) でWeisel教授らと共同発表した。その他、新しい変異として Fbg Kamogawa でγArg275→Ser (研究業績2)、Tokyo VでγAla 327 → Thr (未発表)、Tottori IIでBβ(1-31)残基断片の欠失 (未発表) を同定した。
また、 Fbg の構造-機能関係の分析に有力なモノクロナル抗体の作成に成功した (研究業績9)。

Research Products

• [Publications] Wei Yang: "Two-step spreading mode of human glioma cells on fibrin monomer : Interaction of α_V β_3 with the substratum followed by interaction of α_5 β_1 with endogenous cellular fibronectin secreted in the extracellular matrix"Thromb Res. 93. 279-290 (1999)
• [Publications] Jun Mimuro: "A new type of Ser substitution for γ Arg-275 in fibrinogen Kamogawa I characterized by impaired fibrin assembly"Thromb Haemost. 81(6). 940-944 (1999)
• [Publications] Seiji Madoiwa: "Developmental expression of plasminogen activator inhibitor-1 associated with thrombopoietin-dependent megakaryocytic differentiation"Blood. 94(2). 475-482 (1999)
• [Publications] Mitsuru Nakamura: "Simultaneous core 2β_1 →6N-acetylglucosaminyltransferase up-regulation and sialyl-Le^X expression during activation of human tonsillar B lymphocytes"FEBS Lett. 463. 125-128 (1999)
• [Publications] Michio Matsuda: "Structure and function of fibrinogen : Insights from dysfibrinogens"Thomb Haemost. 82. 283-290 (1999)
• [Publications] DiOrio JP: "Fibrinogen Marburg fibrin network structure"Microsc Microanal. 5. 1120-1121 (1999)
• [Publications] Teruko Sugo: "Fibrinogen Niigata : An abnormal fibrinogen with a Bβ Asn-160 to Ser substitution associated with extra glycosylation at BβAsn-158"Blood. 94. 3806-3813 (1999)
• [Publications] Jiro Kikuchi: "Induction of ubiquitin-conjugating ing enzyme by aggregated low density lipoprotein in human macrophages and its implications for atherosclerosis"Arterioscler Thromb Basc Biol. 20. 128-134 (2000)
• [Publications] Isao Kohno: "A monoclonal antibody specific to the granulocyte-derived elastase-fragment D species of human fibrinogen and fibrin : Its application to the measurement of granulocyte-derived elastase-digests in plasma"Blood. 95. (2000)
• [Publications] Kant M Matsuda: "A novel strategy for the tumor angiogenesis-targeted gene therapy : Generation of angiostatin from endogenous plasminogen by protease gene transfer"Cancer Gene Therapy, in press.
• [Publications] Michio Matsuda: "Structure and function of fibrinogen inferred from hereditary dysfibrinogens"Intern J Haematol, in press.