2001 Fiscal Year Annual Research Report

MAbによる生理活性配糖体の簡易検出・単離法及び小型化抗体遺伝子に関する研究

Research Project

Project/Area Number	11470470
Research Institution	KYUSHU UNIVERSITY
Principal Investigator	正山征洋九州大学, 薬学研究院, 教授 (70037604)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	田中宏幸九州大学, 薬学研究院, 助教授 (30253470)
Keywords	モノクローナル抗体 / 薬理活性配糖体 / イースタンブロテイング / アフィニテイーカラム / ワンステップ単離 / scFV遺伝子 / トランスジェニック植物 / 育種
Research Abstract	本研究では生理活性を持つ生薬由来配糖体(ニンジンのジンセノシド、甘草のグリチルリチン、大黄のセンノシド類、柴胡のサイコサポニン類、サフランのクロセチン配糖体)をターゲットとして、それらに対するモノクローナル抗体(MAb)を作成してきた。それらを用いて高感度で特異性の高いアッセイ法を確立してきた。また、ソラソジン配糖体に対する抗体産生ハイブリドーマから小型化抗体遺伝子を作成し、小型化抗体(scFV)の作成に成功した。ジンセノシド(G)に関してはGRb1,GRg1それぞれに対するMAbを作成し、新免疫染色法としてイースタンブロテイング法を確立した。本法により坑GRb1,GRg1MAbを用いた2重染色に成功した。本法によるとGRb1系統のGは青色、GRg1系統はピンク系統に染色される。従って発色とRf値によりGの構造を容易に類推することを可能にした。その他の配糖体についても同様な開発に成功した。 MAbを装着したアフィニテイーカラムの作成に成功した。坑GRb1MAbの場合、ニンジンエキスをカラムに付し、洗浄液、溶離液の順に添加すると、洗浄液によりGRb1以外の成分と過剰のGRb1が溶出する.次に溶離液によってGRb1のみが溶出し、ワンステップ単離に成功した。また、洗浄液中のG類はカラムを繰り返すことによりGRb1とGRcを分離可能なことが明らかとなった。 scFV遺伝子をハイブリドーマからmRNAを抽出し、転写酵素でcDNAとし、プライマーによりMAbの可変部分、VH, VL遺伝子をクローニングした。両者をリンカーで結合し、プラスミッドに挿入し、発現ベクターに組み換え、大腸菌でscFVタンパクを発現した。本遺伝子をソラソジン配糖体を産生するナス科植物へ導入し、ソラソジン配糖体の高含有株(約3倍)を作出した.

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] S.Shan et al.: "Enzyme-linked immmunosorbent assay for glycylrrhizin using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody and an eastern blotting technique"AnaL.Chem.. 73(24). 5784-5790 (2001)
[Publications] O.Morinata et al.: "Production of monoclonal antibodies against a major purgative component, sennoside B, their characterization and use in ELISA"Analyst. 126. 1372-1376 (2001)
[Publications] N.Fukuda: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component, ginsenoside Rg1 and its characterization"Cytotechnology. 34. 197-204 (2000)
[Publications] K.Watanabe et al.: "Cross-reactivity of various tetrahydrocannabinol metabolites with a monoclonal antibody against tetrahydrocannabinolic acid"J.Helth Sci.. 46(4). 310-313 (2000)
[Publications] O.Morinaga et al.: "Production of monoclonal antibody against a major purgative componet. sennoside B, their charactrization and ELISA"Analyst. 125. 1109-1113 (2000)
[Publications] N.Fukuda et al.: "Isolation of pharmacologically active saponin geinsenoside Rb1 from ginseng by immunoaffinity column chromatography"J.Nat.Prod.. 63(2). 283-285 (2000)
[Publications] S.Shan et al.: "ELISA, western blotting, immunocytolocalozation and immunoaffinity column for naturally occurring bioactive compounds using MAb"J.Food Drug Analysis. 11 (2000)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

MAbによる生理活性配糖体の簡易検出・単離法及び小型化抗体遺伝子に関する研究

Principal Investigator

正山 征洋 九州大学, 薬学研究院, 教授 (70037604)

Research Products

[Publications] S.Shan et al.: "Enzyme-linked immmunosorbent assay for glycylrrhizin using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody and an eastern blotting technique"AnaL.Chem.. 73(24). 5784-5790 (2001)

[Publications] O.Morinata et al.: "Production of monoclonal antibodies against a major purgative component, sennoside B, their characterization and use in ELISA"Analyst. 126. 1372-1376 (2001)

[Publications] N.Fukuda: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component, ginsenoside Rg1 and its characterization"Cytotechnology. 34. 197-204 (2000)

[Publications] K.Watanabe et al.: "Cross-reactivity of various tetrahydrocannabinol metabolites with a monoclonal antibody against tetrahydrocannabinolic acid"J.Helth Sci.. 46(4). 310-313 (2000)

[Publications] O.Morinaga et al.: "Production of monoclonal antibody against a major purgative componet. sennoside B, their charactrization and ELISA"Analyst. 125. 1109-1113 (2000)

[Publications] N.Fukuda et al.: "Isolation of pharmacologically active saponin geinsenoside Rb1 from ginseng by immunoaffinity column chromatography"J.Nat.Prod.. 63(2). 283-285 (2000)

[Publications] S.Shan et al.: "ELISA, western blotting, immunocytolocalozation and immunoaffinity column for naturally occurring bioactive compounds using MAb"J.Food Drug Analysis. 11 (2000)

正山征洋九州大学, 薬学研究院, 教授 (70037604)