1999 Fiscal Year Annual Research Report
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11470484
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
佐藤 隆一郎 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (50187259)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
土井 健史 大阪大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (00211409)
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| Keywords | コレステロール / SREBP / 転写調節 / 転写因子 / 分解 |
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| Research Abstract |
核内分解に先立ち、SREBPの小胞体から核への移行機構について解析を行った。リコンビナントSREBP-2(活性型)を調製し、ジギトニン処理をしたHeLa細胞を用いて核輸送実験を行った。SREBP-2は細胞質を加えた条件下で、温度依存的に核へ輸送され、またこの輸送はATPを必要とし、WGA(Wheat Germ Agglutinin)処理により核への輸送は阻害された。
このSREBPの核輸送が、SV40T抗原の核移行シグナル(NLS:Nuclear Localization Signal)を介した輸送機構と同一か否かを明らかにする目的で核移行シグナルを付加したアルブミンを過剰に加え、阻害効果を観察した。核移行シグナルを付加したGFP(Green Fluorescent Protein)の核輸送は過剰量の核移行シグナル付加アルブミンにより阻害されたが、SREBP-2のそれは阻害を受けなかった。さらに、結合実験から、SREBP-2は核移行シグナルと結合するlmportin αとは結合しないことが明らかになり、lmportin α/βとの複合体を形成して核輸送される核移行シグナル含有蛋白質とは異なる機序で核輸送されることが推察された。
リコンビナントSREBP-2と結合する因子を探索した結果、lmportin βが見出されてきた。この結合は、Ran-GTPにより解離し、Ran-GDPにより影響を受けなかった。この知見に基づいて、lmportin β、Ran、NTF2(p10)を添加し、核輸送を観察すると、この3者共存下でSREBP-2は核へ輸送された。SREBP-2のlmportin β結合部位を明らかにするため、部分欠損リコンビナントSREBP-2を作成し、結合実験を行った。その結果、basic-rich領域を欠いたHLH-Zip領域がlmportin βと結合することが明らかになった。この領域をGFPと連結した融合蛋白質を調製し、lmportin β、Ran、NTF2(p10)共存下で核輸送実験を行うと、融合蛋白質は核へと輸送され、この部位がlmportin β依存的な核輸送に必須であることが示された。
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[Publications] Sato,R.: "Transcriptional Regulation of the ATP Citrate-lyase Gene by Sterol Regulatory Element-binding Proteins"J.Biol.Chem.. 275(in press). (2000)
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[Publications] Mori,M.: "Presence of phospholipid-neutral lipoid complex structures in atherosclerotic lesions as detected by a novel monoclonal antibody"J.Biol.Chem.. 274. 24828-24837 (1999)
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[Publications] Sato,R.: "Sterol regulatory element-binding protein negatively regulates microsomal triglyceride transfer protein gene transcription"J.Biol.Chem.. 274. 24714-24720 (1999)
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[Publications] Yamaguchi,M.: "Characterization of cleavage enzymes for sterol regulatory element binding protein in hamster liver microsomes"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 258. 542-547 (1999)
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[Publications] Imanaka,T.: "Characterization of the 70-kDa peroxisomal protein, an ATP-binding cassette transporter"J.Biol.Chem.. 274. 11968-11976 (1999)
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[Publications] Nagoshi,E.: "Nuclear import SREBP-2,a basic helix-loop-helix-leucine zipper (bHLH-Zip)-containing transcription factor occurs through direct interaction of importin b with HLH-Zip"Mol.Biol.Cell. 10. 2221-2233 (1999)
