2000 Fiscal Year Annual Research Report
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11480166
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| Research Institution | OSAKA UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
木下 タロウ 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (10153165)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村上 良子 大阪大学, 微生物病研究所, 教務職員 (00304048)
永宗 喜三郎 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (90314418)
大石 一人 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60273702)
井上 徳光 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (80252708)
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| Keywords | GPIアンカー / 翻訳後修飾 / 小胞体 |
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| Research Abstract |
GPIアンカー生合成経路のうち、未知のステップを明らかにることを目的とし以下の成果を得た。
i)生合成の第一ステップに働く酵素を活性を保持した形で精製することに成功し、前年度までに知られていた4成分に加えてさらに2つの成分が含まれていることを示した。このうち新規のPIG-Pをクローニングし活性に必須であることを証明した。もう一つはドリコールリン酸マンノース合成酵素の制御に働くDPM2であって、DPM2によって第一ステップの酵素系も制御されていることを証明した。
ii)ドリコールリン酸マンノース合成酵素を活性を保持した形で精製し、DPM1,DPM2に加え新規のDPM3が含まれていることを示した。DPM3はDPM2によって安定化され、DPM3が触媒サブユニットのDPM1を安定化することを証明した。
iii)第1のマンノースの転移酵素PIG-Mをクローニングしその転移が小胞体の内腔側で起こることを証明した。その結果第一のマンノースの直前のステップでGPI中間体が細胞質側から内腔側へフリップすることが示された。
iv)第3のマンノースにエタノールアミンリン酸を付加するのに、我々がクローニングしたPIG-Oが働くこと、PIG-Oが以前クローニングしていたPIG-Fによって安定化されることを示した。
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[Publications] Ohishi,Kazuhito.: "Gaa1p and Gpi8p are components of a glycosylphosphatidylinositol (GPI)-transamidase that mediates attachment of GPI to proteins."Mol.Biol.Cell. 11. 1523-1533 (2000)
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[Publications] Maeda,Yusuke: "Human dolichol-phosphate-mannose synthase consists of three subunits,DPM1,DPM2 and DPM3."EMBO J.. 19. 2475-2482. (2000)
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[Publications] Hong,Yeongjin: "Requirement of PIG-F and PIG-O for transferring phosphoethanolamine to the third mannose in glycosylphosphatidylinositol."J.Biol.Chem.. 275. 20911-20919. (2000)
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[Publications] Nagamune,K.isoburo: "Critical roles of glycosylphosphatidylinositol for Trypanosoma brucei."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 97:. 10336-10341. (2000)
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[Publications] Watanabe,Reika: "Initial enzyme for glycosylphosphatidylinositol biosynthesis requires PIG-P and is regulated by DPM2."EMBO J.. 19:. 4402-4411. (2000)
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[Publications] Maeda,Yusuke: "PIG-M transfers the first mannose to glycosylphosphatidylinositol on the lumenal side of the ER."EMBO J.. 20. 250-261 (2001)
