1999 Fiscal Year Annual Research Report

新規な神経栄養因子PCTF35に関する分子生物学的研究

Research Project

Project/Area Number	11480226
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	内山安男大阪大学, 医学系研究科, 教授 (10049091)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	大沢良之大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30273642) 和栗聡大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30244908) 渡部剛大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (80220903) 亀高諭大阪大学, 医学系研究科, 助手 (10303950) 井佐原京子大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30303944)
Keywords	PCTF35 / 神経栄養因子 / PC12細胞 / bcl-2 / 脊髄後根神経節 / 神経細胞死 / 神経突起 / NGF
Research Abstract	私達は、bcl-2遺伝子導入株から野性型PC12細胞の生存を促進する蛋白としてPCTF35を同定した。今回、私達は、vaculovirusの系を用いて、高タイターの発現株の作製に成功し。同遺伝子をsf9細胞株で調整し、さらにhigh five cell lineに発現させ、ヒスチジンタグ-ニッケルカラム法により同蛋白質を精製した。野性型PC12細胞は、前述した如く血清非存在下で培養するとアポトーシスで死ぬ。血清非存在下で、神経栄養因子(NGF)が存在すると突起を伸ばして神経細胞様に分化する。野性型PC12細部を2.5x10^3/mlの低濃度、無血清条件下で培養すると24時間以内にでほとんどの細胞はアポトーシスに陥る。この条件で培地に100ng/mlのNGFを添加死、生存する細胞数を100%生存率として、PCTF35の生存活性を検討したところ、2μg/mlでNGFの約50%、5μg/mlで100%の生存活性を示した。さらに、興味あることには、無血清条件とほぼ同定度の生存活性しか示さない低濃度のNGF(2ng/ml)とPCTF5μg/mlとを同時添加すると、その生存活性はNGF100ng/ml単独の生存活性の1.5倍に増幅した。このことは、PCTF35は単独でPC12細胞に対して生存活性を示すのみならず、NGFとの間に相乗作用があることを示している。RT-PCR法によりPCTF35のMrnaの発現を胎仔と生後8週齢のラットを用いて検討したところ、胎生11日目から15日目までは高く、18日目には低下していた。生後では、胎生期に比べ低いが、精巣、卵巣、下垂体、肺、消化管、脊髄組織で比較的高く、小脳で中程度、大脳では低い発現であった。in situ hybridization法で検討した結果、胎生期11、12日目の胎仔では神経上皮に強い発現がみられた。生後の精巣では精祖細胞、神経細胞に発現がみられた。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Isahara,K.et al.: "Regulation of a novel pathway for cell death by lysosomal aspartic and cysteine proteinases"Neuroscience. 91. 233-249 (1999)
[Publications] Sakahira,H.et al.: "Apoptotic nuclear morphological change without DNA fragmentation"Curr.Biol.. 9. 543-546 (1999)
[Publications] Gotow.T.et al.: "Abnormal expressions in dysmyelinating axons located in the central nervous system of jimpy mutant mice"Eur.J.Neurosci.. 11. 3893-3903 (1999)
[Publications] Waguri,S.et al.: "The induction of autophagic vacuoles and the unique endocytic compartments, c-shaped multivesicular bodies, in GH4C1Cells after treatment with 17b-estradiol,insulin and EGF"Arch.Histol.Cytol.. 62. 423-434 (1999)
[Publications] Mcllroy,D.et al.: "Apoptotic DNA fragmentation by phagocytosis"Gene Develop.. (in press).
[Publications] Gotow.T.et al.: "Selective localizationof Bcl-2 to the inner mitochondrial and smooth endoplasmic reticule membranes in mammalian cells"Cell Death Diff.. (in press).

1999 Fiscal Year Annual Research Report

新規な神経栄養因子PCTF35に関する分子生物学的研究

Principal Investigator

内山 安男 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (10049091)

Research Products

[Publications] Isahara,K.et al.: "Regulation of a novel pathway for cell death by lysosomal aspartic and cysteine proteinases"Neuroscience. 91. 233-249 (1999)

[Publications] Sakahira,H.et al.: "Apoptotic nuclear morphological change without DNA fragmentation"Curr.Biol.. 9. 543-546 (1999)

[Publications] Gotow.T.et al.: "Abnormal expressions in dysmyelinating axons located in the central nervous system of jimpy mutant mice"Eur.J.Neurosci.. 11. 3893-3903 (1999)

[Publications] Waguri,S.et al.: "The induction of autophagic vacuoles and the unique endocytic compartments, c-shaped multivesicular bodies, in GH4C1Cells after treatment with 17b-estradiol,insulin and EGF"Arch.Histol.Cytol.. 62. 423-434 (1999)

[Publications] Mcllroy,D.et al.: "Apoptotic DNA fragmentation by phagocytosis"Gene Develop.. (in press).

[Publications] Gotow.T.et al.: "Selective localizationof Bcl-2 to the inner mitochondrial and smooth endoplasmic reticule membranes in mammalian cells"Cell Death Diff.. (in press).

内山安男大阪大学, 医学系研究科, 教授 (10049091)