2000 Fiscal Year Annual Research Report
赤潮藻類をピンポイント攻撃する安全かつ実用的なバイオレメディエーターの開発
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11555221
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
大竹 久夫 広島大学, 工学部, 教授 (10127483)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
黒田 章夫 広島大学, 大学院・先端物質科学研究科, 助教授 (50205241)
加藤 純一 広島大学, 工学部, 助教授 (90231258)
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| Keywords | 赤潮 / 殺藻物質 / プロテアーゼ / 遺伝子 |
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| Research Abstract |
Pseudoalteromonas sp.A28株が生産する赤潮殺藻物質は、分子量50kDの菌体外セリンプロテアーゼであった。精製プロテアーゼIのN末端アミノ酸配列を決定したところ、Ala-Thr-Pro-Asn-Asp-Proであった。また、プロテアーゼIのトリプシン消化物をTOF-MSで分析し、内部のアミノ酸配列、Gly-Thr-Gly-Asp-Ala-Asp-Leu-Tyr-Val-Pro、Ser-Ser-Thr-Thr-Gln-Ser-Ala-Leu-Asnを得た。これら配列を用いデータバンクに対して相同検索を行ったところ、Alteromonas sp.O-7株のAprIセリンプロテアーゼ(5)と高い相同性を示すことが分った。そこでO-7株のaprI遺伝子をプローブとしてA28株染色体からショットガンクローニングを行い、2.6kbの染色体DNA断片を得た。塩基配列を決定により2073bpのORFが見い出された。このORFがコードする遺伝子産物には、O-7株のAprIプロテアーゼが最も高い相同性を示した。35kDaのAprI成熟蛋白質とセリンプロテアーゼIのそれに相当する部分の相同性は非常に高く、83%のidentityであった。N-末端とC-末端のプロ配列に相当する領域間ではそれぞれ58,72%のidentityであった。
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