2002 Fiscal Year Annual Research Report
赤潮藻類をピンポイント攻撃する安全かつ実用的なバイオレメディエーターの開発
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11555221
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| Research Institution | HIROSHIMA UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
大竹 久夫 広島大学, 大学院・先端物質科学研究科, 教授 (10127483)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
黒田 章夫 広島大学, 大学院・先端物質科学研究科, 助教授 (50205241)
加藤 純一 広島大学, 大学院・先端物質科学研究科, 教授 (90231258)
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| Keywords | プロテアーゼ / 赤潮 / 殺藻活性 |
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| Research Abstract |
スキムミルクポリアクリルアミド電気泳動法により、Pseudoalteromonas sp.A-28株が細胞外に分泌する蛋白質のひとつに、プロテアーゼ活性が認められた。このプロテアーゼは、1,10-phenathrolineにより活性阻害を受けることから、メタルプロテアーゼであることがわかった.大腸菌の形質転換法により、empl遺伝子が細胞外に分泌するメタルプロテアーゼをコードしていることがわかった.このメタルプロテアーゼをコードする遺伝子を大腸菌で発現させたところ、分子量38kDaのメタルプロテアーゼが菌体外に分泌生産されることがわかった。精製したプロテアーゼを赤潮藻Skeletonema costatumに与えたところ、殺藻活性が検出された。この結果から、Pseudoalteromonas sp.A-28株が菌体外に生産するメタルプロテアーゼが確かに赤潮殺藻物質であることが証明された。この他に、A-28株はもう一つ赤潮を殺藻するプロテアーゼを、細胞外に分泌することがわかった。このプロテアーゼは分子量50kDaのモノマーであった。PMSF(フェニルメチルスルフォニルフルオライド)とDIP(ジイソブロピルフルオロリン酸)で活性が阻害されたことから、このプロテアーゼはセリンブロテアーゼであることが示された。セリンブロテアーゼをコードする遺伝子は、キチン分解性の海洋性細菌として分離されたAlteromonas sp.0-7株の菌体外セリンプロテアーゼAprlをコードする遺伝子と高い相同性を示した.
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