ホルモン様環境科学物質のバイオモニターリング技術の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11556016
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 大川 秀郎 神戸大学, 遺伝子実験センター, 教授 (90233048)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 川田 充康 大塚化学(株), 鳴門研究所, 主任研究員 ; 片桐 昌直 大阪教育大学, 教育学部, 助教授 (00185802) ; 中田 昌伸 神戸大学, 農学部, 教授 (40031190) ; 三宅 司郎 (株)バイオ・アプライド・システムズ, 開発・営業部長(研究員)
• Keywords: 外因性内分泌攪乱物質 / ビスフェノールA / ノニルフェノール / モノクローナル抗体 / ELISA / scFv / PCB / アフィニティーカラム

Research Abstract

1.外因性内分泌攪乱化学物質のハプテン、抗原(免疫原)の作製
ビスフェノールA.ノニルフェノールPCB、などのハプテン、抗原(免疫原)などを合成し、免疫原をマウスに免疫して抗体を調製し、また、抗原をELISAの確立に供した。
2.モノクローナル抗体の調製とELISAの確立
免疫原を免疫したマウスから、抗体産生細胞をスクリーニングすることにより、ビスフェノールA.ノニルフェノール、PCBなどに特異的なモノクローナル抗体産生細胞を得、それから調製したモノクローナル抗体を用いたELISAの測定条件を確立した。
とりわけ、PCBに対するモノクローナル抗体はELISAで高感度であった。
3.モノクローナル抗体一本鎖可変領域scFvの調製
モノクローナル抗体産生細胞からmRNAを調製して、それからcDNAを取得するなどを経て一本鎖scFvcのDNAを調製して、それらを大腸菌に発現することによりビスフェノールA.ノニルフェノールに対するscFvを調製した。ビスフェノールAに関しては4種のモノクローナル抗体産生細胞からおのおの相当するscFvを調製し、また、ノニルフェノールについては2種のscFvを調製した。いずれのscFvもELISAにおいて相当するモノクローナル抗体と同等の反応性を示した。また、ビスフェノールAのscFvを組換え大腸菌の培養により大量に調製して、アフィニティーカラムの開発に供した。それを用いて、試料前処理用アフィニティーカラムの基本を確立した。

Research Products

• [Publications] H.Inui: "Metabolism of Herbicides and Other Chemicals in Human Cytochrome P450 Species and in Transgenic Potato Plants Co-Expressing Human CYP1A1, CYP2B6 and CYP2C19"J. Pesticide Sci. 26. 28-40 (2001)
• [Publications] H.Inui: "Herbicide Metabolism and Tolerance in the Transgenic Rice Plants Expressing Human CYP2C9 and CYP2C19"Pesticide Biochemistry and Physiology. 71. 156-169 (2001)
• [Publications] 大川 秀郎: "環境負荷化学物質の環境モニタリング及び環境汚染浄化を目的とした遺伝子組換え植物"BRAIN. 86. 19-22 (2001)
• [Publications] 大川 秀郎: "環境モニタリング・汚染浄化植物の開発"バイオサイエンス. 60(印刷中). (2002)
• [Publications] 西 甲介: "環境負荷化学物質のバイオモニタリング法"日本農薬学会誌. (印刷中). (2002)
• [Publications] 乾 秀之: "遺伝子組換え作物"農薬学事典(本山 直樹編)、朝倉書店. 212-242 (2001)