日本国内における馬バベシア症の浸潤・流行に関する組み換え体抗原等を用いた調査研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11556056
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• Principal Investigator: 藤さき 幸蔵 帯広畜産大学, 原虫病分子免疫研究センター, 教授 (00292095)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 長澤 秀行 帯広畜産大学, 原虫病分子免疫研究センター, 教授 (60172524) ; 玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病分子免疫研究センター, 助手 (10292096) ; 五十嵐 郁男 帯広畜産大学, 原虫病分子免疫研究センター, 助教授 (80159582) ; 宮原 徳治 化学及血清療法研究所, 開発室, 研究員 ; 神尾 次彦 農林水産省, 家畜衛生試験場・原虫病研究室, 室長
• Keywords: ピロプラズマ原虫 / ウマバベシア原虫 / バベシア・エクイ / バベシア・カバリ / PCR / リコンビナント抗原 / モノクロナール抗体 / エライザ

Research Abstract

ウマバベシア病は、マダニ媒介性の2種類のバベシア原虫(Babesia equi、B.caballi)による馬、ラバ、ロバ、シマウマの感染症で、世界的に流行し、非汚染国は日本、米国など極めて少数に過ぎない。本病は、死亡率が時に50%を超えるなど悪性度が高いことから、我が国を含む多くの国々で家畜法定伝染病に指定されるとともに、重要な新興人畜共通感染症としても注目されている。我が国には戦後は現在まで一貫してウマバベシア病の流行・存在はないとされてきたが、最近の国際交易の増大や物流移動の迅速化は、輸出入管理検疫システムによる家畜疾病コントロールを困難なものに変えつつある。
本研究は、我が国で唯一のウマバベシア原虫培養技術を基盤とするウマバベシア原虫の遺伝子組み換え体抗原とこれによる酵素抗体法(ELISA)を開発することによって、我が国におけるウマバベシア病の浸潤・流行の実態について、全国規模での抗体調査を実施しようとするものである。また、抗体陽性馬については、全国的に採集した馬体寄生性マダニと同様に、PCRによるウマバベシア原虫DNAの存否も検討するものである。
平成11年度は、B.equi,B.caballi組み換え体抗原の作製を、(1)赤血球内に寄生している試験管内培養原虫の主要抗原に対するモノクロナール抗体を、B.caballiについても新たに主要膜表面抗原p48などに対するモノクロナール抗体を複数作成した。また、(2)両原虫種の培養虫体(赤内型原虫)のcDNAライブラリーを構築し、モノクロナール抗体による原虫表面抗原蛋白をコードしている遺伝子のスクリーニングを実施するとともに、(3)大腸菌とバキュロウイルスーを発現系として用いた両原虫の抗原蛋白の発現を行って、種々の結果を得ることが出来た。

Research Products

• [Publications] Kawazu S.: "Phylogenetic relationships of the benign Theileria species in cattle and Asian buffalo based on the major surface protein (p33/34) gene sequences"International. Journal for Parasitology. 29・5. 613-618 (1999)
• [Publications] Chansiri K.: "Molecular phylogenetic studies on Theileria parasites based on small subunit ribosomal RNA gene sequences"Veterinary Parasitology. 83・1. 99-105 (1999)
• [Publications] Kawai S.: "Ultrastructural characteristics of Babesia caballi in equine erythrocytes in vitro"Parasitoly Research. 85・10. 794-799 (1999)
• [Publications] Ikadai H.: "Cloning and Expession of a 48-kDa rhoptry protein of Babesia caballi merozoite rhoptry protein and potential use of the recombinant antigen in an enzyme-linked immunosorbent assay"Journal of Clinical Microbiology. 37. 3475-3480 (1999)
• [Publications] Tanaka T.: "Expression of Babesia equi merozoite antigen-2 by recombinant baculovirus and its use in the ELISA"International Journal for Parasitology. 29・11. 1803-1808 (1999)
• [Publications] Ikadai H.: "Inhibitory effect of monoclonal antibodies on the growth of Babesia caballi"International Journal for Parasitology. 29・11. 1785-1791 (1999)