エピトープタグを利用した新規遺伝子ターゲティング法の開発と組換え動物作出への応用

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11556064
• Research Institution: Iwate University
• Principal Investigator: 森松 正美 岩手大学, 農学部, 助教授 (70241370)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉松 組子 北海道大学, 医学部, 助手 (90220722) ; 三好 一郎 東北大学, 医学部, 助手 (10183972) ; 首藤 文榮 岩手大学, 農学部, 教授 (60001533)
• Keywords: エピトープタグ / 標的遺伝子組換え / 分子間相互作用 / 細胞内局在

Research Abstract

本研究の目標は,マウスのジーンターゲティングにおいて従来の主流であったノックアウト解析ではなく,ノックインにより,哺乳動物に存在しない特異的な目印(エピトープタグ)を標的分子に導入し,生体反応におけるその動向を抗エピトーブタグ抗体で調べる方法を開発するための基礎研究を行うことである。本年度は,以下のごとく数種類のモデル遺伝子を標的として研究を展開した。
1.家族性乳癌原因遺伝子産物(Brca2)を標的とした検討
マウスBrca2ゲノムに対して,二段階置換法によるジーンターゲティングを行うことを計画した。ES細胞に導入して第一段階目の置換を施した後、酵素を利用した第二段階目の置換を試みたが、目的とする相同組換え体を得ることができなかった。
2.内毒素誘導性新規遺伝子(MAIL)を標的とした検討
1のごとく、目標とする組換え体をBrca2について得ることができないため、別の遺伝子として内毒素による顕著な発現調節を受ける遺伝子であるMAILを標的とすることを試みた。ゲノムDNAを分離し,塩基配列を決定してその構造を明らかにした。さらにこれを用いてターゲティングベクターを構築してES細胞の標的遺伝子を破壊し、これよりキメラマウスを作製した。
3.キチナーゼ遺伝子(AMCase/CBPb01/gut chitinase)を標的とした検討
キチナーゼは特徴的な組織特異的発現調節を示す遺伝子である。2と同様の理由により、別の標的遺伝子としてキチナゼを選ぴ、cDNAおよびゲノムDNAを得た。
4.新規エピトープタグの開発
新規エピトープの候補であるハンタウイルス核タンパク質について、モノクローナル抗体の特異性解析、および核タンパク質が細胞に与える影響の解析を行った。

Research Products

• [Publications] Shiina, t.: "Genomic organization, chromosomal localization and promoter analysis of the mouse Mail gene"Immunogenetics. 53. 649-655 (2001)
• [Publications] Kitamura, H.: "Bacterial lipopolysaccharide induced mRNA expression of a IkB MAIL mediated through Toll-like receptor 4"J. Vet. Med. Sci. (印刷中).
• [Publications] Suzuki, M.: "A novel serum chitinase that is expressed in bovine liver"FEBS Lett. 506. 127-130 (2001)
• [Publications] Suzuki, M.: "Cellular expression of chitinase mRNA in the gastrointestinal tract of mice and chicken"J. Histochem. Cytochem. (印刷中).