2000 Fiscal Year Annual Research Report
核内ステロイドレセプターによる性ステロイドホルモン様化合物評価系の構築
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11556065
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| Research Institution | Institute of Molecular and Cellular Biosciences, The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
加藤 茂明 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 教授 (60204468)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
四釜 久隆 山之内製薬, 薬理研究所・薬理第三研究室, 室長
柳澤 純 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (50301114)
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| Keywords | 性ステロイドレセプター / 転写共役因子群 / in vitro相互作用 / 転写促進能 / 性ステロイドホルモン様化合物 / 酵母two-hybrid法 / レセプター共役因子 / cDNAスクリーニング |
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| Research Abstract |
本研究では、下記の3点に焦点を当て、核内レセプターに基づいた性ホルモン評価系を、分子生物学的手法に基づき動物細胞内での構築を試みた。
1.性ステロイドレセプターと転写共役因子群とのin vitro相互作用を利用した性ステロイドホルモン様化合物の評価系:前年度に引続き2種のヒト女性ホルモンレセプター(ERα、ERβ)と男性ホルモンレセプター(AR)のAF-2と、SRC-1、TIF2とのリガンド結合依存的な相互作用を検出するin vitro GST pull-down系を構築し、この2者相互作用を誘導もしくは阻害を測定することで、ホルモン様活性の迅速な評価を試みた。
2.転写促進能を利用した性ステロイドホルモン様化合物の高感度生物検定法:1で評価されたステロイドホルモン様化合物が生物活性を有するか否かを、更にステロイドレセプターの転写促進能で検定することで生物検定法とする。ERα、ERβ、ARのAF-2とGAL4DNA結合領域とのキメラタンパクを発現させ、GAL4との結合評価系有するリポーター遺伝子(ルミフェラーゼ)系で、リガンドの転写促進能を調べた。同様な手法で転写共役因子と核内レセプターの相互作用を酵母two-hybrid系にて構築した。この方法でアゴニスト活性のみが検出可能であるが、アンタゴニスト活性は、女性ホルモン(ERα、ERβ)、男性ホルモン(AR)存在下で同様の方法で評価可能であった。
3.性ステロイドホルモン活性を規定するレセプター共役因子の同定:性ステロイドレセプター種(ERα、ERβ、AR)固有の共役因子の検索・同定を、酵母two-hybrid法を用いたcDNAスクリーニング、及び生化学的手法を用いて行った。この時第一には転写を促進する因子群の同定を目指したが、同時にクロマチン構造を制御する因子や、細胞周期を制御する因子などの同定も試みた。特に後者の因子の同定は、各種ホルモンの細胞複製・細胞増殖への作用を分子レベルで初めて明らかにできる足掛かりと期待された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Watanabe,M.,Yanagisawa,J.,Kato,S., et al.: "A subfamily of of RNA binding DEAD box proteins acts as an estrogen receptor α coactivator through the N-term in al activation domain (AF-1) with an RNA coactivator, SRA."EMBO J.. 20. (2001)
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[Publications] Li,M.,Indra,A.,Kato,S., et al.: "Skin abnormalities generated by temporally-controlled RXRα mutations in adult mouse epidermis."Nature. 407. 633-636 (2000)
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[Publications] Kodera,Y.,Takeyama,K.,Kato,S., et al.: "Ligand-type specific interactions of peroxisome proliferator activated receptor gamma with transcriptional coactivators"J.Biol.Chem.. 275. 33201-33204 (2000)
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[Publications] Kobayashi,Y.,Yanagisawa,J.,Kato,S., et al.: "p300 Mediates functional synergism between AF-1 and AF-2 of estrogen receptor α and β by interacting directly with the N-terminal A/B domains."J.Biol.,Chem.. 275. 15645-15651 (2000)
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[Publications] Fuse,H.,Kitagawa,H.,Kato,S.: "Characterization of transactivational property an dcoactivator mediation of rat miner alocorticoid receptor AF-1."Mol.Endocrinol.. 14. 889-899 (2000)
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[Publications] Tai,H.,Kubota,N.,Kato,S.: "In volvement of nuclear receptor coactivator SRC-1 in estrogen-dependent cell growth of MCF-7 cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 311-316 (2000)
