2000 Fiscal Year Annual Research Report

クローン技術の応用による動脈硬化研究のためのトランスジェニックウサギの開発

Research Project

Project/Area Number	11557016
Research Institution	佐賀医科大学
Principal Investigator	渡辺照男佐賀医科大学, 副学長 (40037396)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	本田一男山之内製薬筑波研究所, 薬理研究所長范江霖筑波大学, 基礎医学系, 講師 (60272192) 木本雅夫佐賀医科大学, 医学部, 教授 (40153225)
Keywords	体細胞核移植技術 / クローンウサギ / トランスジェニックウサギ / 単為発生 / 卵細胞活性化 / 動脈硬化 / リポ蛋白 / 動物モデル
Research Abstract	体細胞核移植技術を用いたヒトアポ蛋白(a)トランスジェニック[apo(a)Tg]ウサギの作製を目指して以下の基礎的技術の検討を行った。 (1)ウサギ未受精卵子の採取法:妊娠馬血清およびヒトゴナドトロピン(hCG)を用いた未受精卵の過剰排卵法を確立した。 (2)未受精卵の培養条件に関する検討:ウサギ未受精卵子の単為発生における至適培地を検討するため、未受精卵細胞を電気刺激により活性化後種々の培地で培養した。培養7日後において桑実胚あるいは胚盤胞を形成した割合を指標に至適培地を検討したところ、ES細胞培養用に調製された培地および血清を用いると81.5%の卵細胞が桑実胚あるいは胚盤胞を形成した。 (3)卵細胞活性化における卵細胞質表現型の影響:未受精卵細胞は淡明で均質な細胞質[Homogeneous(H)型]であるものと顆粒状細胞質[Granulous(G)型]であるものとに大別される。そこでH型およびG型卵細胞別に単為発生能を観察したところ、桑実胚あるいは胚盤胞への形成率がG型では0〜26%であるのに対してH型では67%と有意に高く、H型では単為発生能力が高いことが考えられた。 (4)ドナー細胞の調製:apo(a)Tgウサギ胎仔より繊維芽細胞を分離、培養した。繊維芽細胞におけるapo(a)遺伝子の発現はゲノムDNAを用いたPCR法により確認した。 (5)卵細胞とドナー細胞の細胞融合:hCG注射後15〜17時間後に未受精卵子を採取し、H型,G型卵細胞とを分別した。H型卵細胞をHoechst33342で染色後、蛍光顕微鏡下で第2減数分裂中期の染色体を吸引除去した。次に無血清培地下で3日間培養したドナー細胞を囲卵腔内に注入し電気刺激により細胞融合・活性化を行った。現在、調製した融合細胞を偽妊娠させた雌ウサギの卵管内に移植し、3週間後に帝王切開を行うことにより胎仔が作製されるかどうかを検討中である。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Fan,J.,Unoki,H.,Watanabe,T.: "Role of endothelin-1 in atherosclerosis"Ann New York Acad Sci. V. 84-94 (2000)
[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Watanabe,T.: "Transgenic rabbits expressing human apo(a) as a useful model for the study of lipoprotein(a)"Ann New York Acad Aci.. V. 347-351 (2000)
[Publications] Araki,M.,Fan,J.,Watanabe,T.: "Transgenic rabbits expressing human lipoprotein lipase"Cytotechnology. 33. 93-99 (2000)
[Publications] Wu,L.,Fan,J.,Watanabe,T.: "Induction and regulation of matrix metalloproteinase-12 by cytokines and CD-40 signaling in monocyte/macrphages"Biochem Biophy Res Commun. 269. 808-815 (2000)
[Publications] Kobayashi,T.,Miyauchi,T.,Iwasa,S.,Fan,J.,Nagata,M.,Watanabe,T.: "Corresponding distributions of increased endothelin-B receptor expression and increase endothelin-1 in the aorta of apoE-deficient mice with advanced atherosclerosis"Pathol Int. 50. 929-936 (2000)
[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Marcovina,S.,Watanabe,T.: "Defects of LDL receptor in transgenic WHHL rabbits lead to a marked accumulation of plasma lipoprotein(a)"J Lipid Res. 41. 1004-1012 (2000)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

クローン技術の応用による動脈硬化研究のためのトランスジェニックウサギの開発

Principal Investigator

渡辺 照男 佐賀医科大学, 副学長 (40037396)

Research Products

[Publications] Fan,J.,Unoki,H.,Watanabe,T.: "Role of endothelin-1 in atherosclerosis"Ann New York Acad Sci. V. 84-94 (2000)

[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Watanabe,T.: "Transgenic rabbits expressing human apo(a) as a useful model for the study of lipoprotein(a)"Ann New York Acad Aci.. V. 347-351 (2000)

[Publications] Araki,M.,Fan,J.,Watanabe,T.: "Transgenic rabbits expressing human lipoprotein lipase"Cytotechnology. 33. 93-99 (2000)

[Publications] Wu,L.,Fan,J.,Watanabe,T.: "Induction and regulation of matrix metalloproteinase-12 by cytokines and CD-40 signaling in monocyte/macrphages"Biochem Biophy Res Commun. 269. 808-815 (2000)

[Publications] Kobayashi,T.,Miyauchi,T.,Iwasa,S.,Fan,J.,Nagata,M.,Watanabe,T.: "Corresponding distributions of increased endothelin-B receptor expression and increase endothelin-1 in the aorta of apoE-deficient mice with advanced atherosclerosis"Pathol Int. 50. 929-936 (2000)

[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Marcovina,S.,Watanabe,T.: "Defects of LDL receptor in transgenic WHHL rabbits lead to a marked accumulation of plasma lipoprotein(a)"J Lipid Res. 41. 1004-1012 (2000)

渡辺照男佐賀医科大学, 副学長 (40037396)