1999 Fiscal Year Annual Research Report
ホリスタチン関連蛋白のトランスジェニックマウスの開発とその関節炎における意義解明
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11557038
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
尾崎 承一 京都大学, 大学院・医学研究科, 講師 (00231233)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大本 安一 大塚製薬, 細胞工学研究所, 主任研究員
杉野 弘 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (50211305)
小川 佳宏 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (70291424)
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| Keywords | ホリスタチン関連蛋白 / トランスジェニックマウス / トランスジーン / II型コラーゲンプロモーター / PCR / FLAGエピトープタグ / DBA / Iマウス |
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| Research Abstract |
本年度はホリスタチン関連蛋白(Follistatin-related protein:FRP)トランスジーンの作製を完了し、本研究のコントロール実験ともなる誘導関節炎実験も行った。
マウスFRP(TSC36,mFRP)cDNAは完全長のものがクローニングされなかったため、複数のcDNA断片をライゲーションし復元した。作製過程において制限酵素EcoRIのスター活性によりN末端側EcoRI欠失はトランスジーン用制限酵素末端を持つcNDAのPCRによる作製時に、リンカープライマー法と共にオーバーラップ伸長法を利用することにより修復された。この時トランスジェニックマウスにおけるトランスジーン由来産物の確認容易化のため、FLAGエピトープタグをもつmFRP(FLAG-mFRP)のcDNAも作製した。修復された4クローン(mFRP,FLAG-mFRP各々2クローン)のcDNAは全て塩基配列を決定し、欠失のPCRによる塩基のミスインコンポレーションが無いことが確認された。II型コラーゲンプロモーターを持つトランスジーン用ベクターCol2alはテキサス大学のBenoit de Crombrugghe氏より供与され、これに上記2種類のmFRPcDNAをライゲーションしトランスジーン(Col2al-mFRP,Col2al-FLAG-mFRP)を完成させた。プラスミドpBluescript IIでクローニングしたCol2al-mFRP及びCol2al-FLAG-mFRPは必要量を制限酵素で切り出し直鎖状DNA断片として調整し、現在関節炎易誘導マウスであるDBA/1マウスの卵にインジェクションする段階である。
並行してBALB/cマウスの誘導関節炎をコントロール実験として行った。BALB/cマウス4匹に抗ニワトリII型コラーゲンマウスモノクローナル抗体の4種混合抗体液(IBL 社 Arthritogenic mAb Cocktail)とLPSを投与し全例に対し関節炎の誘導に成功した。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Sobajima J.,Ozaki S.,et al.: "Prevalence and characterization of P ANCA directed against HMG1 and HMG2 in ulcerative colitis"Clin.Exp.Immunol.. 111・2. 402-407 (1998)
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[Publications] Uesugi H.,Ozaki S.,et al.: "Prevalence and characterization of novel P ANCA,antibodies to the high mobility group non histone chromosomal proteins HMG1 and HMG2, in systemic rheumatic diseases"J.Rheumatol.. 25. 703-709 (1998)
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[Publications] Tanaka M.Ozaki S.,et al.: "Cloning of follistain related protein (FRP) as a novel autoantigen in systemic rheumatic diseases"Int.Immunol.. 10・9. 1305-1314 (1998)
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[Publications] Sobajima J.,Ozaki S.,et al.: "High mobility group non histone chromosomal proteins HMG1 and HMG2 are significant target antigens of perinuclear anti neutrophil cytoplasmic antibodies in autoimmune hepatitis"Gut. 44・6. 867-873 (1999)
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[Publications] Shinkura N.,Ozaki S.et al.: "Autoantibodies to FK506 binding protein 12(FKBP12) in autoimmune diseases"Autoimmunity. 29. 159-170 (1999)
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[Publications] Ochiai K.,Ozaki S.,et al.: "Genetic regulation of anti-erythrocyte autoantibodies and splenomegaly in autoimmune hemolytic anemia-prone New Zealand Black mice"Int.Immunol.. 12・1. 1-8 (2000)
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[Publications] 尾崎承一(共著): "わかりやすい内科学"文光堂(東京)、井村裕夫・主幹編集. 1178 (1999)
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[Publications] 尾崎承一(共著): "内科学"文光堂(東京)、黒川清・松澤佑次・主幹編集. 2233 (1999)
