1999 Fiscal Year Annual Research Report
中枢神経疾患治療薬の新しい脳内移送評価系の開発-in vitro血液脳関門モデルの実用化-
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11557107
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
加藤 泰治 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (60094364)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三浦 裕 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (90285198)
浅井 清文 名古屋市立大学, 医学部, 助教授 (70212462)
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| Keywords | 血液脳関門 / 脳毛細血管内皮細胞 / BBBモデル / アストロサイト / 不死化 / アストロサイト産生因子 |
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| Research Abstract |
脳損傷・虚血や中枢神経変性疾患など、すべての脳機能障害の治療には、まず、ニューロン死を抑える神経栄養因子をはじめシナプス形成を促進する薬剤を同定することが一義的であり、次には、これらの因子や薬剤が有効に脳組織へ移行するか否かを判定するための血液脳関門(BBB)モデル系を開発する必要がある。当該研究者は、脳血管内皮細胞とアストロサイトを二重層共培養することにより選択的透過機能をもつBBBモデルを作成した。そこで平成11年度は、多大な経費と労力を要する動物実験の代替となるBBBモデル系の実用化を図るための簡便な「スクリーニング系」の確立することに成功した[Sobue K et al.Neurosci.Res.in press]。具体的には、ウシ脳毛細血管内皮細胞にSV40 large T抗原遺伝子を導入し不死化したtBBEC117細胞株を樹立した。ダブルチャンバー培養器に不死化脳血管内皮細胞(外側チャンバーをアストロサイト(内側チャンバー)とを離して共培養することにより、不死化脳毛細血管細胞株でもBBB特異的機能発現(密着帯、mdr、Glut-1、透過性の低下など)があることを確認した。このことはアストロサイトが何らかの液性因子を分泌し脳毛細血管細胞にBBB特異的形質の発現を誘導している可能性が示された。現在このアストロサイト産生性因子の同定を試みている。
今回確立できたBBBモデル系を用いれば、アルツハイマー病や脳血管痴呆の治療・予防のための新規薬剤の探索範囲は格段に拡大し、さらに現在使用されている薬剤の効果評価にも利用でき、中枢神経疾患治療薬の開発は飛躍的に発展することを確信する。
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[Publications] Katano,H.: "Traumatic injury in vitro induces IEG mRNA in cultured glial cells, suppressed by coculture with neurons"NeuroReport. 10. 2439-2448 (1999)
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[Publications] Sobue,K.: "Induction of Blood-brain barrier properties in immortalized bovine brain endothelial cells by astrocytic factors"Neurosci. Res.. 35. 155-164 (1999)
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[Publications] Sobue,K.: "Molecular cloning of two bovine aquaporin-4 cDNA isoforms and their expression in brain endothelial cells"Biochim. Biophys. Acta. 1486. 389-394 (1999)
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[Publications] Hotta,T.: "Membrane-bound form of ADP-ribosyl cyclase in rat cortical astrocytes in culture"J. Neurochem.. 74. 669-675 (1999)
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[Publications] Fuse,T.: "p27kipl expression by contact inhibition as a prognostic index of human glioma"J. Neurochem.. (in press).
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[Publications] Tsuiki,H.: "Cloning of a rat glia maturation factor-γ (rGMFG) cDNA and expression of its mRNA and protein in rat organs"J. Biochem.. (in press).
