2000 Fiscal Year Annual Research Report
中枢神経疾患治療薬の新しい脳内移送評価系の開発-in vitro血液脳関門モデルの実用化-
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11557107
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
浅井 清文 名古屋市立大学, 医学部, 助教授 (70212462)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三浦 裕 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (90285198)
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| Keywords | 血液脳関門 / 脳毛細血管内皮細胞 / アストロサイト |
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| Research Abstract |
本研究においては、多大な経費と労力を要する動物実験の代替となるBBBモデル系の実用化を図る、すなわち、新規の中枢神経薬の探索範囲を拡大しさらに現在使用されている薬剤の効果評価にも利用できる簡便な「スクリーニング系」を確立することに目的に研究を進めた。脳毛細血管内皮細胞は、初代培養が難しく、大量に入手することは困難を極める。そこで、脳毛細血管内皮細胞を安定かつ大量に供給するために、ウシ脳毛細血管内皮細胞にSV40 large T抗原遺伝子を導入し不死化したtBBEC117細胞株を樹立した。この不死化脳毛細血管内皮細胞をダブルチャンバー培養器の内側チャンバーに培養し、外側チャンバーにアストロサイトを離して共培養することにより、不死化脳毛細血管細胞株でもBBB特異的機能発現(密着帯、mdr、Glut-1、透過性の低下など)があることを確認した[Sobue,K. et al.Neurosci.Res.35:155-164,1999]。このことはアストロサイトが何らかの液性因子を分泌し脳毛細血管細胞にBBB特異的形質の発現を誘導している可能性を示している。このように、アストロサイトからの液性因子によりBBB特異的形質が誘導されことより、BBBモデルにおいて再現性良く実験を進めるために、アストロサイトの安定供給を計る必要も出てきた。そこで、申請者らは、ラット大脳皮質から初代培養したアストロサイトにSV40 large T抗原遺伝子を導入し不死化した細胞株を樹立した。ACT-57と名付けた細胞株は、アストロサイトのマーカータンパクであるGFAP(グリア線維性酸性蛋白)を発現しており、さらにNGF(神経成長因子)を高発現していることが判明した[Morikawa,M. et al.Neurosci.Res.39:205-212,2001]。今後、これら、不死化毛細血管内皮細胞及び不死化アストロサイトを使用し研究を進める予定である。
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[Publications] Yoneda,K. et al.: "Regulation of aquaporin-4 expression in astrocytes."Mol.Brain Res.. (in press).
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[Publications] Yamamoto,N. et al.: "Alterations in the expression of the AQP family in cultured rat astrocytes during hypoxia and reoxygenation."Mol.Brain Res.. (in press).
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[Publications] Miyachi,T. et al.: "Interleukin-1β induces the expression of lipocortin 1 mRNA in cultured rat cortical astrocytes."Neurosci.Res.. (in press).
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[Publications] Kataoka,H. et al.: "Alpha-fetoprotein producing gastric cancer lacks transcription factor ATBF1."Oncogene. (in press).
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[Publications] Fujita,M. et al.: "Regulation of rat hippocampal neural cadherin in the kainic acid induced seizures."Neurosci.Lett.. 297(1). 13-16 (2001)
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[Publications] Morikawa,M. et al.: "Isolation and characterization of a new immortal rat astrocyte with a high expression of NGF mRNA."Neurosci.Res.. 39(2). 205-212 (2001)
