1999 Fiscal Year Annual Research Report
高齢者の唾液腺における水輸送低下の分子機構とその治療薬の開発
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11557137
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
石川 康子 徳島大学, 歯学部, 助教授 (40144985)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
TOMASZ S. M. 徳島大学, 歯学部, 助手 (00294702)
江口 貴文 徳島大学, 歯学部, 助手 (90263847)
石田 甫 徳島大学, 歯学部, 教授 (70028364)
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| Keywords | 水チャネル / アクアポリン-5 / cis-2-methylspiro-(1,3-oxathiolane-5,3')-quinuclidine / 老化 / 唾液腺 / 細胞内カルシウム濃度 / M_3ムスカリン受容体 / 糖輸送体 |
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| Research Abstract |
1]耳下腺・顎下腺に局在する水輸送体の細胞内移動を惹起する薬物の検索とその加齢変化
(1)8週齢ラットより耳下腺・顎下腺の切片を調整し、cis-2-methylspiro-(1,3-oxathiolane-5,3')-quinuclidineやpilocarpineをはじめ各種のM_<3->ムスカリン作動薬とKrebs Ringer Tris(KRT)液(pH7.4)を用いて37℃にて15秒から30分間加湿振盪した後、LongbottomらやVayroらの方法を応用して基底膜,管腔膜,細胞内小胞膜等に細胞分画する。SDS-PAGEに供した後、ニトロセルローズ膜に転写し、抗AQP5抗体を使ってウェスタンブロッティングを行い、デンシトメーターにて解析したところ、神経伝達物質では管腔膜にAQP5を保持する作用が数分で消失するのに対し、cis-2-methylspiro-(1,3-oxathiolane-5,3')-quinuclidineやpilocarpineには管腔膜にAQP5を長時間保持するのに有効であることが明らかとなった。
(2)54,104週齢のラットを用いて上述と同様のことを行ったところ、高齢ラットでもcis-2-methylspiro-(1,3-oxathiolane-5,3')-quinuclidineやpilocarpineは管腔膜にAQP5を長時間保持した。
2]耳下腺・顎下腺の遊離細胞における分泌刺激薬による[Ca^<2+>]iの動態の加齢変化
各週齢ラットの耳下腺・顎下腺切片を0.5mMEGTAの存在下コラゲナーゼとヒアルロニデースで処理して、遊離細胞を得る。KRT液に浮遊後、Fura red-AM(10μM)を30分間室温にて負荷する。種々の作動薬と反応後、アルゴンレーザーをを装備した共焦点顕微鏡にて[Ca^<2+>]i及び[Ca^<2+>]iオシレーションを測定したところ、cis-2-methylspiro-(1,3-oxathiolane-5,3')-quinuclidineやpilocarpineは[Ca^<2+>]iオシレーション8週齢ラットであれ、104週齢ラットであれ、長時間持続した。
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[Publications] Yasuko Ishikawa: "α1-Adrinoceptor-induced trafficking of aquaporin-5 to the apical plasma membrane of rat parotid gland cells."Biochemical and Biophysical Research Communications. 265・1. 94-100 (1999)
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[Publications] Yasuko Ishikawa: "SNI-2011 acts on M3-receptors and induces the long-lasting increase in the amount of aquaporin-5 in the apical plasma membrane of rat parotid glands"The Japanese Journal of Pharmacology. 79 Suppl.I. 92 (1999)
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[Publications] Mariusz T.: "Enhancement by epinephrine of benzylpenicillin transport in rat small intestine."The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 293・1(in press). (2000)
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[Publications] Yasuko Ishikawa: "Aquaporin water channel in salivary glands."The Japanese Journal of Pharmacology. 83(in press). (2000)
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[Publications] Yasuko Ishikawa: "Trafficking in salivary gland of transmembrane protein,aquaporin5 water channel."Journal of Dental Research. 79・5(in press). (2000)
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[Publications] Yasuko Ishikawa: "Control and Diseases of Sodium Dependent Transport Proteins and Ion Channels: Trafficking of AQP5 water channel in parotid glands by neurotransmitters"ELSEVIER SCIENCE BV (in press). (2000)
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[Publications] Yasuko Ishikawa: "Control and Diseases of Sodium Dependent Transport Proteins and Ion Channels: Epinephrine-induced transmural transport of benzylpenicillin in rat small intestine"ELSEVIER SCIENCE BV (in press). (2000)
