2001 Fiscal Year Annual Research Report
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11557196
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
中条 茂男 昭和大学, 薬学部, 助教授 (50119236)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平林 敬浩 昭和大学, 組換DNA実験室, 助手 (40297015)
塩田 清二 昭和大学, 医学部, 教授 (80102375)
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| Keywords | シヌクレイン / シヌクレイン結合タンパク質 / 神経変性 / 14-3-3θ / メタロチオネイン |
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| Research Abstract |
これまでに報告がない両生類、爬虫類の中枢神経系におけるシヌクレインファミリー遺伝子について解析した。両生類はウシガエルを、爬虫類はアオダイショウを用い、両者から大脳を摘出しcDNAライブラリーを作製した。いずれのライブラリーからも約15、000クローンを得た。プローブはヒトβ-シヌクレインのドメインIを用いた。スクリーニングの結果、アオダイショウからは、10個の陽性クローンを得ているが、現在塩基配列について解析中である。ウシガエルについては、これからスクリーニングを行う予定である。
機能が不明であるタンパク質の機能を明らかにするためには、そのタンパク質に対する結合タンパク質の同定が有用である。本研究では、酵母を用いたTwo-Hybrid法により、β-シヌクレイン結合タンパク質の解析を行い、結合タンパク質として、14-3-3θ、メタロチオネイン2Aを同定した。ラット大脳の細胞抽出液を試料に用いて、免疫沈降-イムノブロット実験を行って両タンパク質がβ-シヌクレインと生理的条件下で結合することを証明した。また、メタロチオネイン3の結合も明らかにした。野生型α-シヌクレイン、および変異シヌクレインA30P, A53Tについても現在解析中である。
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