血清中脂質フリーアポ蛋白濃度の測定法確立とその臨床的応用

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11557204
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Gifu University
• Principal Investigator: 清島 満 岐阜大学, 医学部, 教授 (10171315)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 和田 久泰 岐阜大学, 医学部, 助手 (10283300) ; 斉藤 邦明 岐阜大学, 医学部・附属病院, 講師 (80262765) ; 湊口 信也 岐阜大学, 医学部, 助教授 (20190697) ; 斉藤 和典 第一化学薬品(株), 診断薬研究所, リサーチマネージャー ; 藤井 秀比古 岐阜大学, 医学部, 助手 (50301213)
• Keywords: Lipid-free apolipoprotein / ELISA / Coronary heart disease / Atherosclerosis / pre β HDL

Research Abstract

血清中のHDLには脂質成分の乏しいいわゆるpre βHDLが存在しており、末梢組織からコレステロールを引き抜く力がαHDLに比べて大きいことが知られている。しかしこのpre βHDLは二次元電気泳動法による測定であり、時間的にも経費的にも実際的ではない。そこで分子量の大きさの違いを利用して、この脂質フリーアポA-Iの測定を試みた。まずHPLCにより分取したフラクションをELISAによりアポA-Iを測定し、その分布を確認した。次いでコレステロールおよびリン脂質も同様に測定しプロットし、これら脂質成分をほとんど含有しないアポA-Iのフラクションが脂質フリーアポA-Iに相当すると考えた。
1.限外ろ過法:血清を2,5,10倍で希釈して、分子量ポアサイズ30万の膜を用いて15,000rpm,1hr遠心したがVLDLやLDLの一部までが下層に落ちていた。そこで分子量10万の膜にて検討したところ下層にアポA-Iは検出されず、少なくとも限外ろ過法のみでは測定不可能であると考えられた。
2.沈殿法:ヘパリン・マンガンによりVLDL,LDLを沈殿させ、その上清(含HDL)を上記限外ろ過にて検討した。HDLも沈殿する条件ではフリーアポA-Iも同時に沈殿してしまい、限外ろ過にて検出できなかった。しかしHDLが上清に残る条件ではろ過液中にアポA-Iが検出され、現在その至適条件について検討中である。
3.モノクローナル抗体の作製:Fieldingらの報告に従い、pre βHDL A-Iに対するモノクローナル抗体の作製を試みているが、現在のところまだ完成していない。

Research Products

• [Publications] Vilpo J,et al.: "Blood soluble Fas/Apo-1 (CD25) in chronic lymphocytic leukemia"Eur.J.Haematol.. 62. 352-353 (1999)
• [Publications] 清島 満 他: "リポ蛋白X(X)"日本臨床. 57. 39-41 (1999)
• [Publications] 清島 満 他: "リポ蛋白(a)とそのフェノタイプ"日本臨床. 57. 42-44 (1999)
• [Publications] 浦上克哉 他: "髄液中アポA-IおよびE"日本臨床. 57. 158-161 (1999)