2000 Fiscal Year Annual Research Report
プリン代謝酵素欠損を標的とした選択的癌化学療法の開発に関する研究
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11557205
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
登 勉 三重大学, 医学部, 教授 (60106995)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
長田 寛 中外製薬(株), 創薬第二研究所, 主任研究員(研究職)
堀 浩樹 三重大学, 医学部, 助手 (40252366)
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| Keywords | MTAP / Taqman PCR / MTAPプロモーター / メチル化 |
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| Research Abstract |
正常細胞と癌細胞での核酸代謝における違いを利用した選択的化学療法には、MTAP欠損の正確な診断が不可欠である。研究代表者は、MTAP酵素欠損細胞株を用いてMTAP遺伝子の構造解析を行った。MTAP酵素欠損は、1例を除く全例で遺伝子欠失が原因であり、しかも常に3'末端の第8エクソンが消失していることが判明した。この成果を基に、3番染色体長腕に存在するMTAP偽遺伝子をコントロールにを用いたReal-time PCRによる遺伝子診断法を開発した。方法を簡略に述べると、MTAPエクソン8と偽遺伝子それぞれのPCR増幅部位に内部プローブ(Taqmanプローブ)を設計し、PCR反応を行う。各サイクル毎に反応が進むと、Taqmanプローブから遊離した蛍光が励起されるので、PCR産物を定量的に測定できる。同時に測定した偽遺伝子のPCR産物量と比較して、遺伝子欠失の診断を行う。この方法を用いてAdult T-cell leukemia(ATL)患者検体を検討したところ、末梢血液中の白血病細胞が30%以上であれば正確にホモ接合性欠失が診断できることを証明した。また、遺伝子欠失の無いMTAP酵素欠損細胞を詳細に検討したところ、プロモーター領域のメチル化によって転写が阻害されていることがわかった。脱メチル化剤による処理で、MTAP mRNAが発現されることが確認された。このことは、酵素欠損が、遺伝子欠失以外の機序に依っても起こることを示しており、MTAP酵素タンパク質の有無を調べる検査法の開発が重要であることを示唆している。
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Research Products
(1 results)
