ES細胞の無血清無フィーダー培養系の確立とそれによる純系マウス由来ES細胞の樹立

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11558099
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 丹羽 仁史 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80253730)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮崎 純一 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (10200156) ; 田代 文 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (40136213)
• Keywords: インスレーター / 胚性幹細胞 / 遺伝子発現

Research Abstract

(1)cDNA発現ライブラリーのスクリーニングによる方法
昨年度より継続しているcDNA発現ライブラリーのスクリーニングによるES細胞の分化抑制/増殖刺激因子KSRSの単離の試みは、現在も遺伝子同定には至っていない。今後、ライブラリーサイズの拡大が必要と考えられ、現在その準備を進めている。
(2)既知のサイトカイン/増殖因子の効果の検討
既知のサイトカイン/増殖因子の検討において、growth differentiation factor(GDF)-3が未分化ES細胞特異的に発現していることを見い出した。その組み換えタンパクの精製が困難なために、機能解析は未だ完了していないが、現在精製方法の検討を進めている。しかし、その細胞内シグナル伝達に関与すると考えられるSmadの活性化を抑制Smadの強制発現によって阻止すると、ES細胞の増殖が抑えられ、逆にアンチセンス法で抑制Smadの発現を抑えるとES細胞の増殖が亢進することから、現在これがKSRSの有力な候補であると考えている。
(3)血清からのKSRSの精製
血清中にもKSRS活性が認められることから、ここからの精製も進めており、陰イオン交換等の分画で濃縮が可能であることが確認された。現在、大量精製の為のプロトコールを確立するために、詳細な条件検討を進めており、近日中にその作業に着手出来る予定である。

Research Products

• [Publications] Niwa,H.,Miyazaki,J.-I.and Smith,A.G.: "Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells"Nature Genetics. 24. 372-376 (2000)
• [Publications] Kawamoto,S.,Nlwa,H.,Tashiro,F.,Sano,S.,Kondoh,G. et al: "A novel reporter mouse strain that expresses enhanced green fluorescent protein upon Cre-mediated recombination"FEBS Letters. 470. 263-268 (2000)