2000 Fiscal Year Annual Research Report
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11650817
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
大政 健史 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助手 (00252586)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
片倉 啓雄 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助手 (50263207)
岸本 通雅 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (00144436)
菅 健一 大阪大学, 大学院・工学研究科, 教授 (20029250)
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| Keywords | 遺伝子増幅 / FISH(Fluorescene in situ hybridization) / フローサイトメーター |
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| Research Abstract |
細胞培養を用いて、有用物質生産を行う場合、通常、目的とする有用物質遺伝子を遺伝子組換え手法を用いて細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行わせ、目的物質を高度に生産する細胞株を取得している。遺伝子増幅現象を利用する場合には、まず、目的有用物質遺伝子と、増幅可能な遺伝子の両方を持つベクターを構築する。次に、これを細胞に組み込み、増幅可能な遺伝子の産物に対する阻害剤耐性を獲得した細胞を選択する。最終的に、増幅可能な遺伝子と、目的有用物質遺伝子の両方が増幅された細胞株(目的有用物質高生産株)を取得することができる。本研究では、染色体上の特定遺伝子の位置を明らかにできるFISH(fluorescence in situ hybridization)法を用いて、遺伝子増幅領域と、目的遺伝子の生産性、安定性との関係について検討した。昨年は蛍光標識した増幅遺伝子dhfrに対する阻害剤F-MTX(Methotrexate)を細胞内にとりこませることにより、細胞内遺伝子増幅量の多い細胞を特異的にラベルすることに成功した。さらに、この方法とこれまでに行われたFISHの結果を組み合わせることにより、特異的に特定の領域において遺伝子増幅が起こっている細胞を取得する可能性が示唆された。そこで本年度は、この手法を用いた実際の細胞分取に際して、蛍光度の高細胞、すなわちF-MTXの取り込み量が高い細胞が実際に生産性の高い(遺伝子増幅がよく行われているか)について検証した。その結果、F-MTXの取り込み量の高い細胞は、遺伝子増幅がよくおこなわれている細胞と、膜変異によってF-MTX蓄積量が高くなっている細胞の2種類が存在することが判明した。
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[Publications] Tomohiro Yoshikawa,Fumi Nakanishi,Seima Itami,Daisuke Kameoka,Takeshi Omasa,Yoshio Katakura,Michumasa Kishimoto and Ken-ichi Suga: "Evaluation of stable and highly productive gene amplified CHO cell line based on the location of amplified gene"Cytotechnology. Vol33 No.S,1-3. 37-46 (2000)
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[Publications] Tomohiro Yoshikawa,Fumi Nakanishi,Yuki Ogura,Daisuke Oi,Takeshi Omasa,Yoshio Katakura,Michumasa Kishimoto and Kan-ichi Suga: "Amplified gene location in chromosomal DNA affected recombinant protein production and stability of amplified genes"Biotechnology Progress. Vol.16 No.5. 710-715 (2000)
