1999 Fiscal Year Annual Research Report
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11660003
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
谷坂 隆俊 京都大学, 農学研究科, 助教授 (80026591)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
堀端 章 近畿大学, 生物理工学部, 助手 (70258060)
中崎 鉄也 京都大学, 農学研究科, 助手 (60217693)
奥本 裕 京都大学, 農学研究科, 講師 (90152438)
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| Keywords | イネ / 易変性遺伝子 / トランスポゾン |
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| Research Abstract |
イネ易変性突然変遺伝子slg(YACクローンY3356とY1774の重複部分に座乗)のクローニングを目的として、まずY1774をプロ一ブとしてイネ品種日本晴の幼苗由来cDNAライブラリーから199個のクローンを選抜した。得られたクローン間の異同を調査するため、λgt11用プラィマーを用いてファージに挿入されたcDNA断片をPCRにより増幅した後、ダイターミネーター法によってcDNA断片の塩基配列を調査した。この結果、54種のcDNA断片(平均断片長500〜800bp)を増幅することができ、53種については100〜300塩基長の配列を決定することができた。判明した塩基配列に基づいて選抜したクローンから同一クローンと考えられるクローンを排除した結果、53個中少なくとも33個は独立したクローンであると考えられた。現在、これらクローンとY33556とのハイブリダイズの有無を検定している。また、PCR法により増幅できなかったcDNAクローンに関しては、増幅できるPCR条件を探索中である。
次に、slg座近傍のコスミド・コンティグを作成するため、酵母株からYAC(Y1774)を抽出し、パルスフィールド電気泳動法によりYACを分離したが、アガロースゲルから分子量の大きなYACを完全な形で取り出すことは困難であった。YACの回収効率をあげて部分消化したYAC-DNAをコスミドベクターに導入する方法を検討している。
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