2000 Fiscal Year Annual Research Report

酵母マンノプロテイン糖鎖分解酵素群の構造と機能部位の解明

Research Project

Project/Area Number	11660069
Research Institution	Tohoku University
Principal Investigator	中島佑東北大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20091720)
Keywords	マンノプロテイン / マンノシダーゼ / マンノシダーゼ遺伝子 / 1,2-α-マンノシダーゼ / 酵母マンナン
Research Abstract	昨年度は、細菌Bacillus sp.M-90の1,2-α-マンノシダーゼ遺伝子のクローニングをおこなし、遺伝子を(aman2)命名した。また大腸菌での発現モ抗体をもちいたウエスタンブロット法にて確認した。本年度は、1)大腸菌で得られたリコンビナント酵素を精製し性質をしらべ、native酵素との比較を行った。リコンビナント酵素の分子量はゲルろ過で380kDa,SDS-PAGE 190kDaとなり、Native酵素(380kDa190kDa)と一致した。N末端アミノ酸配列においても両者は一致し、大腸菌内でのシグナルペプの切断が、Nativeのものと同じ位置でおこなわれていた。その他、至適pH6.0,至適温度45℃もnativeのものと一致した。基質に対する作用様式も、1,2-α-マンノシド結合もつオリゴ糖のみに作用し、とくに高マンノース型糖鎖の1,2-α-マンノシド結合を効率よく完全に分解した。 2)部位突然変異による触媒部位の検索をこころみたが、分子量380kDの大きなタンパク質であることと、いままでに全く知られていない未知の遺伝子で、またそのホモログも報告がなく、触媒ドメインの予想ができない状況でのアラニン・スキャンは困難ということで、断念した。

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] 一島英治他: "Molecular and enzymic properties of recombinant 1,2-α-mannosidase from A.saitoi overexpressed in A.oryzae cells."Biochem.J.. 339. 589-597 (1999)
[Publications] 丸山穣他: "The aman6 Gene Encoding a Yeast Mannan Backbone Degrading 1,6-α-D-Mannanase in Bacillus circulans : Cloning, Sequence Analusis, and Expression."Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64(9). 2018-2020 (2000)
[Publications] 前田浩他: "Identification of N-terminal Autodigestion Target Site in Subitilisin ALPI."Biosci.Biotechnol.Biochem.(note). (印刷中). (2001)
[Publications] 前田浩他: "Alkaline-Resistance Model of Subtilisin ALPI, a Novel Alkaline Subtilisin."Journal of Biochemistry. (印刷中). (2001)
[Publications] 鈴木哉子他: "Characterization of Recombinant Yeast Exo-β-1.3-Glucanase (Exg1p) Expressed in Escherichia coli Cells."(印刷中). (2001)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

酵母マンノプロテイン糖鎖分解酵素群の構造と機能部位の解明

Principal Investigator

中島 佑 東北大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20091720)

Research Products

[Publications] 一島英治 他: "Molecular and enzymic properties of recombinant 1,2-α-mannosidase from A.saitoi overexpressed in A.oryzae cells."Biochem.J.. 339. 589-597 (1999)

[Publications] 丸山穣 他: "The aman6 Gene Encoding a Yeast Mannan Backbone Degrading 1,6-α-D-Mannanase in Bacillus circulans : Cloning, Sequence Analusis, and Expression."Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64(9). 2018-2020 (2000)

[Publications] 前田浩 他: "Identification of N-terminal Autodigestion Target Site in Subitilisin ALPI."Biosci.Biotechnol.Biochem.(note). (印刷中). (2001)

[Publications] 前田浩 他: "Alkaline-Resistance Model of Subtilisin ALPI, a Novel Alkaline Subtilisin."Journal of Biochemistry. (印刷中). (2001)

[Publications] 鈴木哉子 他: "Characterization of Recombinant Yeast Exo-β-1.3-Glucanase (Exg1p) Expressed in Escherichia coli Cells."(印刷中). (2001)

中島佑東北大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20091720)

[Publications] 一島英治他: "Molecular and enzymic properties of recombinant 1,2-α-mannosidase from A.saitoi overexpressed in A.oryzae cells."Biochem.J.. 339. 589-597 (1999)

[Publications] 丸山穣他: "The aman6 Gene Encoding a Yeast Mannan Backbone Degrading 1,6-α-D-Mannanase in Bacillus circulans : Cloning, Sequence Analusis, and Expression."Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64(9). 2018-2020 (2000)

[Publications] 前田浩他: "Identification of N-terminal Autodigestion Target Site in Subitilisin ALPI."Biosci.Biotechnol.Biochem.(note). (印刷中). (2001)

[Publications] 前田浩他: "Alkaline-Resistance Model of Subtilisin ALPI, a Novel Alkaline Subtilisin."Journal of Biochemistry. (印刷中). (2001)

[Publications] 鈴木哉子他: "Characterization of Recombinant Yeast Exo-β-1.3-Glucanase (Exg1p) Expressed in Escherichia coli Cells."(印刷中). (2001)