2000 Fiscal Year Annual Research Report
サルモネラ菌の腸管上皮細胞への接着・侵入に関与する分子およびそのレセプターの同定
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11660305
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| Research Institution | NATIONAL INSTITUTE OF INFECTIOUS DISEASES |
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Principal Investigator |
五十君 靜信 国立感染症研究所, 食品衛生微生物部, 室長 (70212743)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
天野 富美夫 国立感染症研究所, 細胞化学部, 主任研究官 (90142132)
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| Keywords | サルモネラ / Salmonella Enteritidis / 接着因子 / T-84細胞 / Caco-2細胞 / fliC |
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| Research Abstract |
Salmonella Enteritidis;SEに対する抗血清RY542(抗対数増殖期菌)とRY422(抗静止期菌)を用いた検討から、分化させたヒト腸管上皮細胞Caco-2細胞に対するSE#40株の接着阻止には、SDS-PAGEによる泳動で52kDaの位置に見られ、抗血清RY542が認識するSEP52タンパク(昨年はP86タンパクと表記)が関係しており、そのN末のアミノ酸の配列から、このタンパクがfliCであることを示した。フラジェリンを固定したアフィニティカラムを用いてRY542から得られた抗fliC精製抗体は、SEのCaco-2細胞への接着を阻止し、fliCがSEの細胞への接着に関わるタンパクであることを確認した。一方、RY542を用いたウェスタンブロッティングで検出されるSEP52は、抗血清RY422では認識されず、この事実とRY422に見られるSEのCaco-2細胞に対する強い接着阻止は、細胞への接着に関わる別のタンパクの存在を示唆した。RY422で認識される主なタンパクは6種類である。Caco-2細胞の表層タンパクをビオチンでラベルすると、SEから抽出したタンパクのSDS-PAGEによる泳動で63kDaと23kDaの位置に見られる2つの分子を強く認識していることが示された。ヒト腸管上皮細胞T-84に対し、RY422は対数増殖期のSEの4℃での接着を強く阻害したが、静止期のSEの接着は余り阻害しなかった。しかし、37℃での細胞内への取り込みは、増殖期にかかわらず強く阻害したことから、加温によって速やかにこの抗体と反応する抗原がSEに出現することが示唆された。この抗体が認識するそれぞれ増殖期におけるSEの抗原をSDS-PAGE/Western blottingで解析した結果、いずれも68,38,24,14kDaの抗原を検出したが静止期の方が発現が強く、対数増殖期で急激に発現される抗原は32 kDa以外に見い出すことができなかったことから、今後、菌体表面での抗原の分布の変化の可能性をあわせて検討する必要があることが示唆された。
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[Publications] Sugita-Konish Y et al.: "Blockade of Salmonella enteritidis passage across the basolateral barrier of human intestinal epicelial cells by specific antibody"Microbiol.Immunol.. 44巻. 473-479 (2000)
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[Publications] 天野富美夫,唐橋久恵,石井克幸,五十君靜信: "サルモネラ(Salmonella enteritidis)のヒト上皮系細胞株T-84への接着を阻害する抗体の開発とサルモネラの増殖期の違いに関する研究"BACTERIAL ADHERENCE研究会講演録. 14巻(印刷中). (2000)
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[Publications] 五十君靜信,熊谷進: "食中毒"治療学. 34巻. 707-710 (2000)
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[Publications] 五十君靜信: "組換え乳酸菌を用いた粘膜ワクチンの開発"腸内細菌学雑誌. 14巻. 31-33 (2000)
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[Publications] Igimi S.: "Development of the recombinant vaccines with Lactic Acid Bacteria as antigens delivery vehicles for mucosal immunization."J.Intestinal Microbiol.. 14巻. 67-73 (2001)
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[Publications] Fukuda S,Tatsumi H,Igarashi H and Igimi S.: "Rapid detection of Staphylococcus aureus using bioluminescent enzyme immunoassay."Lett.Appl.Microbiol.. 31巻. 134-138 (2000)
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[Publications] Ishii,Y. et al.: "Regulatory role of C-terminal residue of SulA for its degradation by Lon protease in Escherichia coli."J.Biochem.(Tokyo). 127巻. 837-844 (2000)
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[Publications] Karahashi,H.,Amano,F.: "Lipopolysaccharide (LPS)-induced cell death of C3H mouse peritoneal macrophages in the presence of cycloheximide : different susceptibilities of C3H/HeN and C3H/HeJ mice macrophages."J.Endotoxin Res.. 6巻. 33-39 (2000)
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[Publications] Karahashi,H.,Nagata,K.,Ishii,K.,Amano,F.: "A selective inhibitor of p38 MAP kinase, SB202190, induced apoptotic cell death of a lipopolysaccharide (LPS)-treated macrophage-like cell line, J774.1."Biochim.Biophys.Acta.. (in press). (2001)
