2000 Fiscal Year Annual Research Report

時計遺伝子の機能:視交叉上核培養系における検討

Research Project

Project/Area Number	11670057
Research Institution	HOKKAIDO UNIVERSITY
Principal Investigator	本間さと北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (20142713)
Keywords	サーカディアンリズム / 視交叉上核 / 遺伝子変異マウス / 神経細胞培養 / アンチセンス / マルチチャネル細胞外記録 / 時計遺伝子
Research Abstract	本研究では、視交叉上核神経細胞のサーカディアンリズムを指標に、個々の時計遺伝子や候補遺伝子の機能を明らかにすることを目的として、自家繁殖したWistar系ラットおよびリズム変異マウスClockを用い、以下の実験を行った。 (1)アンセンスによる時計遺伝子機能の検討マルチチャンネル細胞外記録システムを用いて新生仔視交叉上核の分散培養を行い、単一神経細胞の自発発火リズムを連側測定し、安定したサーカディアン周期のリズムを発振する時計細胞において、その様々な位相に時計遺伝子BMAL1のアンチセンス10μMを6時間投与し、その後の周期変化、位相変位を解析した。その結果、個々の視交叉上核細胞においてリズム位相依存性の位相変位を確認した。アンチセンス効果は、免疫組織学的検索可能な高感度の抗体が作成できず、in situ hybridizationによるmRNA発現レベルでの判定に止まった。この結果、BMAL1遺伝子がリズム発振に必須の遺伝子であることが単一視交叉上核神経レベルで明らかとなった。 (2) Clock変異マウスの視交叉上核神経細胞活動リズム Clock変異マウスの視交叉上核をマルチ電極上でスライス培養し、神経活動リズムを長期にわたり測定解析した。その結果、単一視交叉上核神経細胞の活動リズムの平均周期は、ホモ接合マウスで27.2時間、へテロ接合で24.8時間、野生型では23.5時間であり、行動リズムの周期とほぼ一致した。また、神経活動リズムの振幅、リズムを示す神経の割合には野生型とClockマウスとの間に有意差がみられなかった。Clockマウスの行動リズムは連続暗で無周期を呈するのに対し、単一神経レベルでは安定したリズムが出現することが明らかとなり、時計遺伝子Clockの変異は視交叉上核レベルではサーカディアン周期を延長させ、行動リズムの無周期はリズム出力の障害であることが分かった。

Research Products
(15 results)

All Other

All Publications (15 results)

[Publications] Shirakawa, T.: "Synchronization of circadian firing rhythms in cultured rat suprachiasmatic neurons."Eur.J.Neurosci.. 12. 2833-2838 (2000)
[Publications] Shinohara, K.: "Circadian release of excitatory amino acids in the suprachiasmatic nucleus culture is Ca^<2+>-independent."Neurosci.Res. 36. 245-250 (2000)
[Publications] Ikeda, M.: "cDNA cloning of a novel bHLH-PAS transcription factor superfamily gene, BMAL2 : Its mRNA expression, subcellular distribution, and chromosomal Iocalization."Biochem.Biophys.Res.Commun. 275. 493-502 (2000)
[Publications] Masubuchi, S.: "Clock genes outside the suprachiasmatic nucleus involved in manifestation of locomotor activity rhythm in rats."Eur.J.Neuro-science.. 12. 4206-4214 (2000)
[Publications] Honma, S.: "Synaptic communication of cellular oscillations in the rat suprachiasmatic neurons."Neurosci.Lett.. 294. 113-116 (2000)
[Publications] Tanahashi, Y.: "Continuous measurement of targeted promoter activity by a secreted bioluminescence reporter, Vargula hilgendorfii luciferase"Analytica Biochem. 289(in press). (2001)
[Publications] Namihira, M.: "Circadian pattern,light responsiveness and localization of rPerl and rPer2 gene expression in the rat retina."Neuroreport. 12(in press). (2001)
[Publications] Abe, H.: "Clock gene expressions in the suprachiasmatic nucleus and other areas of the brain during rhythm splitting in CS mice."Mol.Brain Res.. (in press). (2001)
[Publications] Namihira, M.: "Daily variation and light responsiveness of mammalian clock gene Clock and its partner gene, BMAL1, transcripts in the pineal body and different areas of brain in rats."Neuroreport. (in press). (2001)
[Publications] Suzuki, T.: "Quantitative trait locus analysis of abnormal circadian period in CS mice."Mammalian Genome. (in press). (2001)
[Publications] 本間研一: "時計遺伝子"脳の科学. 22. 499-503 (2000)
[Publications] 本間さと: "時間医学ヒトのリズムー環境への同調メカニズム"脳の科学. 22. 555-561 (2000)
[Publications] 安倍博: "体内時計の分子機構"自律神経. 37. 163-168 (2000)
[Publications] 本間さと: "時計遺伝子と脳のリズム"神経研究の進歩. 44. 868-873 (2000)
[Publications] Honma, S.: "Zeigebers, Entrainment and Masking of the Circadian System"Hokkaido Univ. Press, Sapporo,. (2000)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

時計遺伝子の機能:視交叉上核培養系における検討

Principal Investigator

本間 さと 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (20142713)

Research Products

[Publications] Shirakawa, T.: "Synchronization of circadian firing rhythms in cultured rat suprachiasmatic neurons."Eur.J.Neurosci.. 12. 2833-2838 (2000)

[Publications] Shinohara, K.: "Circadian release of excitatory amino acids in the suprachiasmatic nucleus culture is Ca^<2+>-independent."Neurosci.Res. 36. 245-250 (2000)

[Publications] Ikeda, M.: "cDNA cloning of a novel bHLH-PAS transcription factor superfamily gene, BMAL2 : Its mRNA expression, subcellular distribution, and chromosomal Iocalization."Biochem.Biophys.Res.Commun. 275. 493-502 (2000)

[Publications] Masubuchi, S.: "Clock genes outside the suprachiasmatic nucleus involved in manifestation of locomotor activity rhythm in rats."Eur.J.Neuro-science.. 12. 4206-4214 (2000)

[Publications] Honma, S.: "Synaptic communication of cellular oscillations in the rat suprachiasmatic neurons."Neurosci.Lett.. 294. 113-116 (2000)

[Publications] Tanahashi, Y.: "Continuous measurement of targeted promoter activity by a secreted bioluminescence reporter, Vargula hilgendorfii luciferase"Analytica Biochem. 289(in press). (2001)

[Publications] Namihira, M.: "Circadian pattern,light responsiveness and localization of rPerl and rPer2 gene expression in the rat retina."Neuroreport. 12(in press). (2001)

[Publications] Abe, H.: "Clock gene expressions in the suprachiasmatic nucleus and other areas of the brain during rhythm splitting in CS mice."Mol.Brain Res.. (in press). (2001)

[Publications] Namihira, M.: "Daily variation and light responsiveness of mammalian clock gene Clock and its partner gene, BMAL1, transcripts in the pineal body and different areas of brain in rats."Neuroreport. (in press). (2001)

[Publications] Suzuki, T.: "Quantitative trait locus analysis of abnormal circadian period in CS mice."Mammalian Genome. (in press). (2001)

[Publications] 本間研一: "時計遺伝子"脳の科学. 22. 499-503 (2000)

[Publications] 本間さと: "時間医学ヒトのリズムー環境への同調メカニズム"脳の科学. 22. 555-561 (2000)

[Publications] 安倍博: "体内時計の分子機構"自律神経. 37. 163-168 (2000)

[Publications] 本間さと: "時計遺伝子と脳のリズム"神経研究の進歩. 44. 868-873 (2000)

[Publications] Honma, S.: "Zeigebers, Entrainment and Masking of the Circadian System"Hokkaido Univ. Press, Sapporo,. (2000)

本間さと北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (20142713)