2000 Fiscal Year Annual Research Report
活性ミクログリアは脳血液関門の虚血再潅流障害を修復する
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11670092
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| Research Institution | NAGASAKI UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
丹羽 正美 長崎大学, 医学部, 教授 (20136641)
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| Keywords | 脳血液関門 / 虚血性神経細胞死 / 脳毛細血管内皮細胞 / ミクログリア / 虚血再潅流障害 / アストロサイト / セリンプロテアーゼ / 組織型プラスミノゲーン・アクチベーター |
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| Research Abstract |
初年度で血液脳関門(BBB)in vitro再構築系の基本構造を作成考案した。パーミアブルサポート構造を基本とし、内部のインサートウェルのフィルター上に内皮細胞、外側のウェルプレート上にアストロサイトを培養する仕組みで、1)膜電気抵抗計による脳毛細血管内皮細胞間の密着結合(tight junction)能評価、2)内皮細胞自体によるエンドサイトーシス(内包化による細胞膜通過機構で、液相(pinocytosis)・吸着・受容体調節性の3種類に機能が分化している)機能評価のために、内部・外部チャンバー内の細胞培養液を灌流させたり、受容体に結合させる放射性リガンド、Lucifer yellow等の色素の添加・採取のためのルート設置など、ダイフージョンチャンバーの構造となっている。BBB細胞株GP8.3細胞(SV40レトロビールス法で不死化されたラット脳毛細血管内皮細胞由来細胞株、申請者の実験室で株細胞として維持されている)と混合培養されるアストロサイトの培養条件も確立された。
虚血再潅流条件;培養液を脱酸素化し、Hypoxiaキットで低酸素刺激し虚血を負荷した。再酸素化を行いBBB機能を評価した。低酸素刺激1、3、6時間のいずれの条件でも、再酸素化3時間で、内包化による細胞膜通過機構によるBBB機能亢進が観察された。この機能亢進は、マウスミクログリア細胞株N9細胞の共培養下で、著明に改善された。この治療効果は、非可逆的セリンプロテアーゼ阻害薬AEBSF(200μM)存在下で有意に抑制された。組織型プラスミノーゲン・アクチベーター(tPA)も同様に改善効果が観察されたが、AEBSFによる修飾は観られなかった。ミクログリア細胞株N9のBBB保護作用は、tPA以外のセリンプロテアーゼの分泌と関連があることが示唆された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Juraj Kopacek: "Upregulation of the genes encoding lysozomal hydrolases, a perforin-like protein, and peroxides in the brains of mice affected with an experimental prion disease"Journal of Virology. 74・1. 411-417 (2000)
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[Publications] Kimihiro Yamashita: "Involvement of the glial endothelin/nitric oxide in delayed neuronal death of rat hippocampus after transient forebrain ischemia"Cellular and Molecular Neurobiology. 20・5. 541-551 (2000)
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[Publications] Hirotomo Shibaguchi: "Transient hypoxia/hypoglycemia upregulates of endothelin B receptors in rat cultured astrocytes"Glia. 31・1. 91-94 (2000)
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[Publications] Maria A.Deli: "Pentosan polysulphate regulates scavenger receptor-mediated, but not fluid-phase, endocytosis in immortalized cerebral endothelial cells"Cellular and Molecular Neurobiology. 20・6. 731-745 (2000)
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[Publications] Maria A.Deli: "Prion Protein fragment 106-126 is toxic to cerebral endothelial cells expressing cellular prion protein"NeuroReport. 11・17. 3931-3936 (2000)
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[Publications] Maria A.Deli: "Tissue plasminogen activator inhibits P-glycoprotein in brain endothelial cells"European Journal of Pharmacology. 411. R3-R5 (2001)
