2000 Fiscal Year Annual Research Report
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11670126
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
藤原 和子 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助教授 (20108880)
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| Keywords | リポ酸活性化酵素 / リポ酸 / リポ酸転移酵素 / グリシン開裂酵素系 / α-ケト酸脱水素酵素複合体 / アシル-CoA合成酵素 / 精製 / クローニング |
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| Research Abstract |
リポ酸はグリシン開裂酵素系のH蛋白及びピルビン酸,α-ケトグルタル酸および分岐鎖α-ケト酸脱水素酵素複合体のE2成分に補酵素として結合している.リポ酸はリポ酸活性化酵素によってlipoyl-AMPとなり,ついでリポ酸転移酵素によってリポイル部分が蛋白に転移される.
本年度はリポ酸活性化酵素に関して以下の成果を得た.
1.リポ酸活性化酵素(LAE)をウシ肝臓ミトコンドリアから単一に精製した.
2.精製されたLAEはGTPを利用してリポ酸をlipoyl-GMPに活性化した.この活性化速度はATPを利用したlipoyl-AMPの生成より約1000倍速いものであった.反応にはリポ酸,GTP,およびMg^<2+>イオンの存在が必須であった.LAEはS-lipoateよりもR-lipoateとの反応性が高いがどちらも活性化することができた.またリポ酸転移酵素は両異性体のlipoyl-GMPからリポ酸をH蛋白に転移した.しかしH蛋白はR-lipoateを補欠分子族としてもつものだけにグリシン開裂反応で活性が認められた.
3.LAEのcDNAをクローン化した.そのアミノ酸配列はウシ肝臓ミトコンドリアのxenobiotic/medium-chain fatty acid:CoA ligase-IIIと同一であった.しかし,SNPによる1つのアミノ酸置換が見いだされた.
4.以上の結果は上記medium-chain acyl-CoA synthetaseがGTPを利用してリポ酸の活性化という新しい機能を発揮することを示している.
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Kazuko Fujiwara: "Purification and cDNA cloning of lipoate-activating enzyme from bovine liver"Abstract Book : 18th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology. 314 (2000)
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[Publications] 藤原和子: "リポ酸活性化酵素の精製とクローニング"生化学. 72-8. 831 (2000)
