2001 Fiscal Year Annual Research Report

筋特異的選択的RNAスプライシングの分子メカニズムの研究

Research Project

Project/Area Number	11670132
Research Institution	JICHI MEDICAL SCHOOL
Principal Investigator	遠藤仁司自治医科大学, 医学部, 講師 (50221817)
Keywords	筋分化 / ATP合成酵素 / RNAスプライシング / 選択的スプライシング / ミトコンドリア / スプライシングサイレンサー / スプライシング因子 / スプライシング調節
Research Abstract	真核生物ではミトコンドリアのATP合成酵素がほとんどのATPを供給している。本酵素ではγサブユニットの筋特異的なアイソフォームが選択的スプライシングにて生成される。本研究ではヒトATP合成酵素γサブユニットの筋特異的スプライシング調節のシス領域およびトランス因子を同定することを目的とした。前年度までに、筋特異的に働くエキソン上のスプライシングサイレンサー(Muscle-Specific Exonic Splicing Silencer ; MS-ESS)配列を明らかにした(J.Biol.Chem.2002,in press)。また本配列の上流にエンハンサー配列が存在することも同定した。本年度はトランス因子の精製を目的とした。まず、本遺伝子のMS-ESS配列を含む領域からリボプローブを作製し、選択的スプライシングの誘導前後の細胞から各々抽出した核抽出液を用いてノースウエスタン法を行いその条件を検討した。次に、各々抽出した核抽出液を硫安沈殿などによる部分精製を行った。これらの標品を用いて二次元電気泳動によるプロテオーム解析を行った。ノースウエスタン法の結果から、スプライシングエンハンサー領域に特異的に結合するスポットを少なくとも3スポット、MS-ESS配列に結合するスポットを2スポット検出した。MS-ESS配列に結合するタンパク量は微量であったため、現在、MS-ESS配列RNAを架橋したアフィニティクロマトグラフィーを作製して多量のタンパクの精製を試みている。またエンハンサー領域に結合するタンパクについては、二次元電気泳動によって得られたスポットを解析したところすべてアミノ酸末端がブロックされていたため、今後さらにタンパクを蓄積してタンパク分解酵素処理後、高速液体クロマトグラフィーにて内部のペプチドを分取しエドマン分解法にて一次配列決定を試みる予定である。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Hayakawa, M.: "Muscle-specific exonic splicing silencer for exon exclusion in human ATP synthase γ-subunit pre-mRNA"J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)
[Publications] Kirito, K.: "TPO regulates Bcl-xL gene expression through stat5 and phosphatidyl inositol-3-kinase activation pathways."J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)
[Publications] Otsuki, T.: "Fanconi anemia protein, FANCA, associates with BRG1, a component of the human SWI/SNF complex"Hum.Mol.Genet.. 10. 2651-2660 (2001)
[Publications] Kagawa, Y.: "Gene therapy by mitochondrial transfer"Adv.Drug Deliv Rev.. 49. 107-119 (2001)
[Publications] Tanaka, M.: "Forkhead family transcription factor FKHRL1 is expressed in human megakaryocytes and regulates cell cycling as a downstream molecule"J.Biol.Chem.. 276. 15082-15089 (2001)
[Publications] Yoshida, S.: "Bacterial expressing single-chain immunotoxin inhibit malaria parasite development in mosguites"Mol.Biochem.Parasitol.. 113. 89-96 (2001)
[Publications] 遠藤仁司: "新ミトコンドリア学"内海耕慥・井上正康監修共立出版. 434 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

筋特異的選択的RNAスプライシングの分子メカニズムの研究

Principal Investigator

遠藤 仁司 自治医科大学, 医学部, 講師 (50221817)

Research Products

[Publications] Hayakawa, M.: "Muscle-specific exonic splicing silencer for exon exclusion in human ATP synthase γ-subunit pre-mRNA"J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)

[Publications] Kirito, K.: "TPO regulates Bcl-xL gene expression through stat5 and phosphatidyl inositol-3-kinase activation pathways."J.Biol.Chem.. 277(in press). (2002)

[Publications] Otsuki, T.: "Fanconi anemia protein, FANCA, associates with BRG1, a component of the human SWI/SNF complex"Hum.Mol.Genet.. 10. 2651-2660 (2001)

[Publications] Kagawa, Y.: "Gene therapy by mitochondrial transfer"Adv.Drug Deliv Rev.. 49. 107-119 (2001)

[Publications] Tanaka, M.: "Forkhead family transcription factor FKHRL1 is expressed in human megakaryocytes and regulates cell cycling as a downstream molecule"J.Biol.Chem.. 276. 15082-15089 (2001)

[Publications] Yoshida, S.: "Bacterial expressing single-chain immunotoxin inhibit malaria parasite development in mosguites"Mol.Biochem.Parasitol.. 113. 89-96 (2001)

[Publications] 遠藤仁司: "新ミトコンドリア学"内海耕慥・井上正康監修 共立出版. 434 (2001)

遠藤仁司自治医科大学, 医学部, 講師 (50221817)

[Publications] 遠藤仁司: "新ミトコンドリア学"内海耕慥・井上正康監修共立出版. 434 (2001)