2000 Fiscal Year Annual Research Report

組織再生・修復に見られる細胞膜結合型増殖因子のShedding-その分子機構と役割-

Research Project

Project/Area Number	11670141
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	東山繁樹大阪大学, 医学部, 助教授 (60202272)
Keywords	wound healing / HB-EGF / shedding / EGFR / Keratinocyte / cell migration
Research Abstract	創傷治癒過程で見られる組織再生・修復の分子機構を細胞膜結合型増殖因子HB-EGFのプロセシング(shedding)の側面から解析し、以下の結果を得た。 1)HB-EGF shedding阻害剤として低分子性合成化合物KB-R8301を同定し、培養ケラチノサイトを用いたin vitro創傷実験、およびマウスを用いたin vivo創傷実験において、KB-R8301の添加によりケラチノサイトの遊走が顕著に阻害され、創傷治癒が抑制された。また、この創傷治癒抑制はリコンビナントHB-EGFの添加により完全に回復した。このから、皮膚創傷時において、内在性のHB-EGFがsheddingを受け、EGFRの活性化を誘導する事が強く示唆された。これらのことから損傷組織の修復時においてHB-EGF等の膜結合型増殖因子のsheddingが極めて重要なステップである事が示唆された。 2)HB-EGF shedding酵素を同定する為にKB-R8301固相化カラムを作製をアフィニティー精製を試みた。まず、KB-R8301をビオチン化しアビジンセファロースへの固相化を行った。KB-R8301のビオチン化によりHB-EGF shedding阻害活性は30%程度に低下したが、アフィニティーカラムとして使用し、ヒト繊維芽肉腫細胞株HT1080細胞のホモジネートより、KB-R8301結合蛋白質として3種類の蛋白質を単一標品にまで精製した。現在、蛋白質の一次構造を解析している。今後これらの蛋白質のcDNAを単離し、細胞に発現させ、HB-EGF shedding活性を検討する。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Yamada,K.,Higashiyama,S., et al.: "Characterization of the human NTAK gene structure and distribution of isoforms for rat NTAK mRNA."Gene. 255. 15-24 (2000)
[Publications] Tokumaru,S.,Higashiyama,S., et al.: "Ectodomain shedding of epidermal growth factor receptor ligands is required for keratinocyte migration in cutaneous wound healing."J.Cell Biol.. 151. 209-219 (2000)
[Publications] Kitada,T.,Higashiyama,S., et al.: "Addition of bisecting N-acetylglucosamine residues to E-cadherin downregulates the tyrosine phosphorylation of β-catenin."J.Biol.Chem.. 275. 475-480 (2000)
[Publications] Fujiyama,S.,Higashiyama,S., et al.: "Angiotensin AT1 and AT2 receptors differentially regulate angiopoietins and VEGF expression and angiogenesis by modulating HB-EGF-mediated EGF receptor transactivation."Cir.Res.. 88. 22-29 (2001)
[Publications] Tokita,Y.,Higashiyama,S., et al.: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes."J.Neroscience.. 21. 1257-1264 (2001)
[Publications] Koh,Y.H.,Higashiyama S., et al.: "Inactivation of glitathione peroxidase by No leads to the accumulation of H2O2 and the induction of HB-EGF via c-Jun NH2-terminal kinase in rat aortic smooth muscle cells."FASEB J.. (in press). (2001)

2000 Fiscal Year Annual Research Report

組織再生・修復に見られる細胞膜結合型増殖因子のShedding-その分子機構と役割-

Principal Investigator

東山 繁樹 大阪大学, 医学部, 助教授 (60202272)

Research Products

[Publications] Yamada,K.,Higashiyama,S., et al.: "Characterization of the human NTAK gene structure and distribution of isoforms for rat NTAK mRNA."Gene. 255. 15-24 (2000)

[Publications] Tokumaru,S.,Higashiyama,S., et al.: "Ectodomain shedding of epidermal growth factor receptor ligands is required for keratinocyte migration in cutaneous wound healing."J.Cell Biol.. 151. 209-219 (2000)

[Publications] Kitada,T.,Higashiyama,S., et al.: "Addition of bisecting N-acetylglucosamine residues to E-cadherin downregulates the tyrosine phosphorylation of β-catenin."J.Biol.Chem.. 275. 475-480 (2000)

[Publications] Fujiyama,S.,Higashiyama,S., et al.: "Angiotensin AT1 and AT2 receptors differentially regulate angiopoietins and VEGF expression and angiogenesis by modulating HB-EGF-mediated EGF receptor transactivation."Cir.Res.. 88. 22-29 (2001)

[Publications] Tokita,Y.,Higashiyama,S., et al.: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes."J.Neroscience.. 21. 1257-1264 (2001)

[Publications] Koh,Y.H.,Higashiyama S., et al.: "Inactivation of glitathione peroxidase by No leads to the accumulation of H2O2 and the induction of HB-EGF via c-Jun NH2-terminal kinase in rat aortic smooth muscle cells."FASEB J.. (in press). (2001)

東山繁樹大阪大学, 医学部, 助教授 (60202272)