1999 Fiscal Year Annual Research Report
マイクロダイセクションを用いた骨髄異形成症候群におけるclonalityの検討
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11670163
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| Research Institution | Hirosaki University |
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Principal Investigator |
黒滝 日出一 弘前大学, 医学部, 助教授 (40215108)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山岸 晋一朗 弘前大学, 医学部, 助手 (80301026)
八木橋 操六 弘前大学, 医学部, 教授 (40111231)
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| Keywords | マイクロダイセクション / 骨髄異形成症候群 / クロナリティー / HUMARA / PGK / X染色体 / PCR |
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| Research Abstract |
骨髄異形成症候群(MDS)骨髄3系の各造血細胞におけるclonalityの有無を検討するためにX染色体上に存在するPGK geneとHUMARA geneによるclonal assayを,女性のMDS(RA5,RAEB13)とde novo AML 5,control 5例を用いて行った.方法1:ホルマリン固定パラフィン包埋骨髄組織を5μmの厚さで連続切片を20枚作成し,HE染色後LCM systemを用いて骨髄球(M)系,赤芽球(E)系,巨核球(Mg)系に分け,顕微鏡を観察しながらmicrodissectionし,DNA抽出を行い,制限酵素Hpa IIないしHha I処理(+)のものと(-)に分けてPCRを行い,電気泳動後検討を加えた.方法2:1と同様に各3系の造血細胞に対してM系は抗MPO抗体,E系は抗glycophorin A抗体,Mg系は抗gpIIb/IIIa抗体,骨髄前駆細胞(S)系は抗CD34抗体を用いて免疫染色を行い陽性細胞のみ採取し,以後1と同様に行った.方法1ではinformativeな結果は得られなかった.方法2ではPGKの結果とHUMARAの結果が一致しなかったが,PGKでM系においてRAEB 3/13,de novo AML 2/5,S系でRAEB 4/13,de novo AML 2/5でmonoclonalityが得られた.HUMARAでもM系においてRAEB 3/13,de novo AML 2/5,S系でRAEB 4/13,de novo AML 2/5でmonoclonalityを示していた.E系,Mg系では明らかなmonoclonalityは得られなかった.今後RAEB症例について白血化の前後での検討を加えることと,HUMARAについてはより高感度であるmethylationspecific PCRでの検討を再度行う予定である.
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