CGHとin situ cytogeneticsによる未分化型胃癌の染色体解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670174
• Research Institution: Shiga University of Medical Science
• Principal Investigator: 杉原 洋行 滋賀医科大学, 医学部, 助教授 (30171169)
• Keywords: CGH / DOP-PCR / DNAプロイディ / マイクロダイセクション

Research Abstract

本研究では、手術摘出されたヒト未分化型胃癌でploidy解析を行い、DNA-diploidの腫瘍細胞にcomparative genomic hybridization(CGH)を適用し、未分化型胃癌の早期に起こるゲノムDNAの変化を明らかにしようとした。しかし、間質成分の多い未分化型胃癌では、Laser capture microdissectionによっても、間質細胞や炎症細胞の除去と腫瘍細胞の十分なenrichmentは困難を極めた。単離細胞のsuspensionを薄くスメアに引いてから腫瘍細胞をcaptureすることも試みたが、スメアではフィルムへの接着が悪く、更なる工夫が必要であることが分かった。そこで、研究期間中に、CGHによる染色体の初期変化の解析の方法論を確立するために、細胞単離の容易な食道癌を用いて基礎的な検討を行った。具体的には、腫瘍病巣より採取しploidyを決定した多数箇所のサンプルから、DOP-PCRによる微量検体からの全ゲノム増幅、DOP-PCRによるプローブの蛍光標識条件のoptimization、DOP-PCRで作成した標識プローブによるCGHを行い、良好なCGHの結果を得ることができた。特にプローブの標識条件を割り出すのにかなりの試行錯誤を要した。CGHのG/R比のshift dis-tanceとploidy modeから,変化した染色体部分の絶対的コピー数を求め、そのデータをもとに、複数のゲノムの変化の時間的前後関係を推定するtemporal analysisの方法論は、培養細胞を用いて確立した(Okada et al.,2000)が、本研究によって、それをin vivoの原発腫瘍の多数箇所のサンプルに応用し、個々の腫瘍に固有の染色体変化のsequenceを明らかにすることができた。この結果は現在投稿中である。

Research Products

• [Publications] 杉原洋行: "蛍光によるDNAの定量的解析:CGHとFISHからin situ cytogeneticsへ"電子顕微鏡. 34(Suppl.2). 101-104 (1999)
• [Publications] 杉原洋行: "FISHによる癌ゲノムDNAの定量的解析"日本臨床細胞学会近畿連合会会誌. 8. 27-42 (2000)
• [Publications] 杉原洋行: "CGHの定量解析:Interphase Karyotypingへの試み"Cytometry Research. 11・1(in press). (2001)
• [Publications] Okada K.: "Sequential numerical changes of chromosomes 7 and 18 in diffuse-type stomach cancer cell lines : combined comparative genomic hybridization,fluorescence in situ hybridization,and ploidy analysis"Cancer Genetics and Cytogenetics. 118. 99-107 (2000)
• [Publications] Bamba M.: "Time dependent expression of intestinal phenotype in signet ring cell carcinomas of the human stomach."Virchows Arch. 438. 49-56 (2001)