非遺伝性神経変性疾患剖検脳および脊髄における過酸化物質の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670196
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 柴田 亮行 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (90226176)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小林 槇雄 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (80060086)
• Keywords: 神経変性疾患 / 活性酸素傷害 / 脂質過酸化 / スーパーオキシドジスムターゼ / トランスジェーックマウス / 筋萎縮性側索硬化症 / 免疫沈降法 / イムノブロット法

Research Abstract

平成11年度に引き続いて、孤発性筋萎縮性側索硬化症(ALS)患者の剖検脊髄中の脂質過酸化カルボニルの濃度測定を、プレートリーダーを用いてEnzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)法により試みたが、対照脊髄と同様に有意なシグナルが得られなかった。これは組織中に含まれる関心物質の濃度が予想よりも低いことを示唆すしている。そこで、脂質過酸化カルボニルが攻撃の対象とする可能性のある蛋白を、特異抗体を用いて免疫沈降法により凍結脊髄組織材料から抽出し、この蛋白に結合する脂質過酸化カルボニルをウエスタンブロット法で検出した。今回、免疫沈降でALS脊髄から抽出した蛋白は、グルタミン酸トランスポーター1型(GLT-1)は対照例と比較して高度にヒドロキシノネナールに修飾されていた。更に、クロトンアルデヒドやカルボキシメチルリジンも反応性アストロサイトに局在していることが判明し、今後これらの標的蛋白を同定することが重要であると考えられる。以上の結果を顕微鏡で撮影した写真をスライドスキャナーでコンピューターにとりこみ、デジタル化した画像を用いて国内学会および国際神経病理学会で発表した。

Research Products

• [Publications] Noriyuki Shibata,Makio Kobayashi, et al: "Superoxide dismutase-1 mutation-related neurotoxicity in familial amyotrophic lateral sclerosis"ALS and Other Motor Neuron Disorders. 1(3). 143-161 (2000)
• [Publications] Shinsuke Kato,Noriyuki Shibata, et al: "New consensus research on neuropathological aspects of familial amyotrohic lateral sclerosis with superoxide dismutase (SOD1) gene mutations : inclusions containing SOD1 in neurons and actrocytes"ALS & other MNDs. 1(3). 163-184 (2000)
• [Publications] Shinsuke Kato,Noriyuki Shibata, et al: "Advanced glycation endproduct-modified superoxide dismutase-1 (SOD1)-positive inclusions are common to familial amyotrophic lateral sclerosis patients with SOD1 mutations and transgenic mice expressing human SOD1 with a G85R mutation"Acta Neuropathologica. 1(5). 490-505 (2000)
• [Publications] Shoichi Sasaki,Noriyuki Shibata, et al: "iNOS and nitrotyrosine immunoreactivity in amyotrophic lateral sclerosis"Neuroscience Letters. 291. 44-48 (2000)
• [Publications] Koichi Itakura,Noriyuki Sibata, et al: "Detection of lipotuscin-like flurophore in oxidized human low-density liporotein : 4-hydroxy-2-nonenal as a potential source of fluorescent chromophore"FEBS Letters. 473. 249-253 (2000)
• [Publications] Noriyuki Shibata: "Transgenic mouse model for superoxide dismutase-1 mutation"Neuropathology. (印刷中). (2001)