1999 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト骨形成因子(BMP)遺伝子群プロモータ領域の解析
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11670214
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
北澤 荘平 神戸大学, 医学部, 講師 (90186239)
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| Keywords | 骨形成因子 / 遺伝子プロモータ / 遺伝子導入 / gelshift Assay / メチル化シトシン |
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| Research Abstract |
I)ヒトBMP-5,6遺伝子の5'側上流領域に結合する転写調節因子を明らかにする。
ヒトBMP-5遺伝子の5'側上流領域-500〜-750に存在するHox遺伝子、En遺伝子反応領域と推定されるDNA配列AAAGGCATTA,TGATAG,ATTTCCATTA,TCAATTAAACTを合成し32Pで標識した後、核抽出蛋白と試験管内で混和し、Gelshift Assayを行った。結合蛋白に関しては、AntennapediaクラスのHox蛋白が想定されるが、特異抗体を用いたsupershiftを用いて確認する予定である。
同様にBMP-6遺伝子5'側上流領域(-50〜-150)のDNA塩基配列
GCGCCGCGACTCGCAGGAGCCAGGGCG(下線部分がtramtrack結合配列と推定される)を用いて、epigeneticalな遺伝子発現制御機構の有無について検討し、BMP-6遺伝子発現の亢進した細胞ではCpGメチル化が存在せず、BMP-6のalternative splicingが存在し、かつ発現の低下した細胞ではSp1結合部位を中心としてCpGメチル化が存在していた。病理検体を用いた検討でも、浸潤・転移の見られた前立腺癌ではBMP-6遺伝子発現の亢進とCpGメチル化の消失とが観察された。
II)BMP-2,-3,-8の5'上流のクローニング解析。
申請者等がBMP-5およびBMP-6遺伝子5'側上流領域解析に用いたヒトGenomicDNA Libraryを利用し、BMP-2,-3,-8遺伝子5'側上流領域をクローニングした。現在、プライマー伸長法による転写開始部位の同定、Reporter遺伝子Luciferaseと結合させたPlasmid Constructをリポフェクション法にて培養細胞に短期導入し、プロモータ活性の測定を行っている。
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[Publications] Kitazawa R et al: "Promoter structure of mouse RANKL/TRANCE/OPGL/ODFgene"Biochemica et Biophysica Acta. 1445・1. 134-141 (1999)
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[Publications] Kitazawa R et al: "In situ demonstration of parathyroid hormone-related protein(PTHrP)mRNA in sclerosing hepatic carcinoma"Virchows Arch Int J Pathol. 435・2. 137-142 (1999)
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[Publications] Kitazawa S et al: "Transcriptional regulation of rat Cyclin D1 gene by CpG methylation status in promoter region"J Biol Chem. 274・40. 28787-28793 (1999)
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[Publications] Kitazawa S et al: "In situ hybridization with polymerase chain reaction-derived single-stranded DNA probe and S1 unclease"Histochem Cell Biol. 111・1. 7-12 (1999)
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[Publications] Fujii H et al: "Expression of platelet derived growth factor(PDGF)proteins and their receptor a,b mRNA during fracture healing in normal mouse"Histochem Cell Biol. 112・2. 131-138 (1999)
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[Publications] Kitazawa S et al: "Identification of methylated cytosine from archival formalin-fixed paraffin-embedded specimens"Lab Invest. (in press). (2000)
