肝星細胞由来の新しい因子の遺伝子クローニングと抗体作製および機能解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670215
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 北村 幸郷 鳥取大学, 医学部, 助教授 (20204919)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 難波 栄二 鳥取大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (40237631) ; 寺田 忠史 鳥取大学, 医学部, 教授 (30188677)
• Keywords: 肝星細胞 / Simian Virus 40 / 温度感受性 / 細胞株 / 増殖 / 分化

Research Abstract

肝星細胞(伊東細胞)は特異な機能を有する肝類洞壁構成細胞で、サイトカインや増殖因子などさまざまな因子を産生し、肝疾患の病態に重要な役割を果たしていると考えられている。これまでに形態学的、生化学的および分子生物学的な解析がなされてきたが、その増殖と分化および機能発現にかかわる遺伝子機構はいまだ明らかにされていない。本研究は肝星細胞の分化および機能発現に重要な役割を果たす遺伝子ならびに肝星細胞が有する新しい因子のクローニングおよび抗体作製を目的として施行された。SV40温度感受性肝星(伊東)細胞株を大型T抗原が発現する許容温度(33度)およびT抗原が消失して分化が誘導される非許容温度(39度)にて培養し、各々の細胞からRNAを調整し、differential display法を用いて、肝星細胞のそれぞれの分化状態において特異的に発現している遺伝子の候補を選択し、さらにpolymerasechain reaction法にて増幅した。肝星細胞の静止状態および活性化状態に特異的に発現していると考えられる遺伝子についてそれぞれシークエンスを行い、またこれらの遺伝子の一部については、In situhybridizationおよびnorthernblottingを用いて、静止状態および活性化状態に特異的に発現していることを確認できた。現在その遺伝子から発現した蛋白に対する抗体を作製中である。この抗体およびプローブを用いてクローニングした遺伝子の機能解析を形態学的、生化学的および分子生物学的に行うことを計画している。

Research Products

• [Publications] Haidi Zhang: "Novel TSC_2 mutation in a patient with pulmonary tuberous sclerosis"American Journal of Medical Genetics. 82. 368-370 (1999)
• [Publications] Yukisato Kitamura: "A case of clear cell carcinoma of the ovary with uncommon histologic components"Journal of the Okayama Surgical Pathology Association. 36. 1-5 (1999)
• [Publications] Yukisato Kitamura: "Primary T cell non-Hodgkin's malignant lymphoma of the appendix"Pathology International. 50(in press). (2000)