C型肝炎ウイルスコアタンパク質によるアポトーシス抵抗性機構の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670292
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 土方 誠 京都大学, ウイルス研究所, 助教授 (90202275)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / 肝炎 / アポトーシス / 肝臓がん / NF-κB / MAPK / 細胞増殖 / ウイルス持続感染

Research Abstract

本研究はC型肝炎ウイルス(HCV)コアタンパク質(以下コアと略す)によるアポトーシス抑制機構の一貫として、その転写因子NF-κBの活性化分子機構を明らかにすることを研究の主たる目的とした。本年度は細胞のNF-κBの活性化経路におけるコアの作用機序についてさらに解析を進め、またコア分子内のNF-κBの活性化領域を用いて、その領域に結合する細胞性因子の同定を試みた。またNF-κB活性化経路以外にアポトーシスとの関連が報告されているRas/MAPキナーゼ経路に対するコアの作用機序についても解析をおこなった。以下に本年度の研究実績をまとめる。
1.種々のNF-κB活性化刺激のすべてに対してコアによるNF-κB活性化の増幅が観察されたため、コアはこれらすべてのNF-κB活性化経路に共通するメカニズムに影響する可能性が考えられた。
2.種々のNF-κB活性化刺激のすべてに共通する経路に存在するキナーゼIKKβの過剰発現によるNF-κBが活性化もコアによって増幅されることがわかった。
3.コア存在下、非存在下におけるIKKβの活性を検討したところ、IKKβのキナーゼ活性は全く変化しないことがわかり、コアがこの経路のIKKβより下流に作用する可能性が明らかとなった。
4.酵母Two Hybrid Assay系を用いて、コアのNF-κB活性化最小領域と特異的相互作用をおこなう細胞性因子のスクリーニングをおこなった。3種類のヒトcDNAライブラリーを検索することによって数種類の陽性クローンを得ることができた。現在その特異性とNF-κB活性化との関連について検討をおこなっている。
5.コアはアポトーシス制御とも密接に関連するRas/MAPキナーゼ経路を活性化するが、コアはリン酸化反応とは別の機構でMAPキナーゼの下流の転写因子の転写活性を上昇させることを示した。
現在さらにこれらの詳細な分子機構について解析を進めている。

Research Products

• [Publications] Katsuhiko Fukuda: "Hepatitis C virus core protein enhances the activation of the transcription factor Elk1 in response to mitogenic stimuli."Hepatology. 33・1. 159-165 (2001)
• [Publications] Shinya Sato: "Cleavage of hepatitis C virus nonstructural protein 5A by Caspase-like protease(s)in mammalian cells"Virology. 270・2. 476-487 (2000)
• [Publications] 土方誠(共著): "C型肝炎ウイルス"アイピーシー. 282 (2000)