IL-7レセプター欠失マウスによる細胞内シグナル分子のT細胞分化における機能解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670317
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 生田 宏一 京都大学, 医学研究科, 助教授 (90193177)
• Keywords: サイトカインレセプター / STAT / γδT細胞 / シグナル伝達 / DNA組換え / ヒストンアセチル化 / 転写共役因子

Research Abstract

IL-7はリンパ球前駆細胞の増殖因子であり、生体内におけるリンパ球の分化にきわめて大きな役割を果たしている。本研究の目的は、IL-7レセプター(IL-7R)のシグナル伝達分子のSTAT5によるヒストンのアセチル化の誘導が、TCRγ遺伝子座のDNA組換え酵素に対するaccessibilityを上昇させV-J組換えを誘導することを証明することにある。
まず、IL-7R欠損マウスの初期胸腺細胞において、TCRγ遺伝子座のヒストンは脱アセチル化されていた。次に、IL-7R欠損マウスの胎児肝臓からT前駆細胞を単離し、レトロウイルスを用いてIL-7RやSTAT5を導入し、haging drop・胎児胸腺器官培養でT細胞に分化させた。IL-7Rを導入したものでは、コントロールベクターと比較して、細胞数が劇的に増加し、γδT細胞も検出された。一方、活性型STAT5を導入したものでは、IL-7R導入時ほどではないが細胞数がある程度回復した。さらに、その際にγδT細胞の分化が見られた。また、TCRγ遺伝子のV-J組換えをPCR法にて、germline転写の誘導をRT-PCRにて、組換えシグナルの二重鎖切断端をligation-mediated(LM)PCRにて解析すると、活性型STAT5を導入したものでいずれも強い誘導が認められた。さらに、TCRγ遺伝子座のヒストンアセチル化も回復していた。以上のことから、STAT5が転写共役因子を5'Jγ1プロモーター領域にリクルートし、ヒストンのアセチル化を介してTCRγ遺伝子座のaccessibilityを上昇させることが示された。

Research Products

• [Publications] Kina,T. et al.: "The monoclonal antibody TER-119 recognizes a molecule associated with glycophorin A and specifically marks the late stages of murine erythroid lineage"Brit.J.Heamatol. 109. 280-287 (2000)
• [Publications] Fagarasan,S. et al.: "Alymphoplasia(aly)-type nuclear factor κB-inducing kinase (NIK) causes defects in secondary lymphoid tissue chemokine receptor signaling and homing of peritoneal cells to the gut-associated lymphatic tissue system"J.Exp.Med.. 191. 1477-1486 (2000)
• [Publications] Kamata,T. et al.: "Increased frequency of surface IgA-positive plasma cells in the intestinal lamina propria and decreased IgA excretion in hyper IgA (HIGA) mice, a murine model of IgA nephropathy with hyperserum IgA"J. Immunol.. 165. 1387-1394 (2000)
• [Publications] Watanabe,N. et al.: "Migration and differentiation of autoreactive B-1 cells induced by activated γδT cells in anti-erythrocyte immunoglobulin transgenic mice"J. Exp. Med.. 192. 1577-1586 (2000)
• [Publications] Fagarasan,S. et al.: "Mechanism of B1 cell differentiation and migration in GALT"Current Topics in Microbiology and Immunology. 252. 221-229 (2000)
• [Publications] Agata,Y. et al.: "Histone acetylation determines the developmentally regulated accessibility for T cell receptor-γ gene recombination"J.Exp.Med.. (in press).
• [Publications] Honda,K. et al.: "Molecular basis for hematopoietic/ mesenchymal interaction during initiation of Peyer's patch organogenesis"J.Exp.Med.,193. 193(in press).
• [Publications] O'Brien,R.L. et al.: "Increased resistance to bacterial infection in mice lacking Vγ1+γδT cells"J.Immunol.,. (in press).
• [Publications] Ikuta.K. et al.: "Role of the IL-7 receptor in gamma-delta T cell development"Chem.Immunol.,. (in press).