個々人にみあった成人病予防法確立に関する研究:高トリグリセリド血症をモデルとして

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670402
• Research Institution: National Cardiovascular Center Research Institute
• Principal Investigator: 高木 敦子 国立循環器病センター, 薬理部, 室長 (90179416)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 池田 康行 国立循環器病センター, 病因部, 室長 (90176107)
• Keywords: リポ蛋白リパーゼ / 高トリグリセリド血症 / へテロ接合体 / 遺伝子変異 / IV型高脂血症 / テーラーメイド医療 / 生活習慣病

Research Abstract

生活習慣病予防のため、個々人の遺伝背景からみた弱点を中心に予防する方法が実際的であると考え、高トリグリセリド(TG)血症をモデル系として、個々人にみあった予防法を確立することを目的とした。本年度はまず、変異を見逃さないためのPCR増幅法について検討した(計画[2])。その結果、プライマーとアニールする部位にSNPがある場合が見いだされたので、PCR時のアニール温度は、非特異的増幅が起こらないかぎり、低く設定する(50-55℃位)ことが両アレルとも平均して増幅する、つまり変異を見逃さないために、重要とわかった。これを考慮して、LPL遺伝子診断迅速化のため、日本における本変異集積を続けた。Y61X変異を見いだした(計画[1])。また、新たな高TG血症者においてLPL遺伝子、イントロン3の3'端より6塩基上流のC→T置換を見いだした。これがLPL異常の真の原因かどうかを、in vitroスプライス系を構築して調べた(計画[3])。その結果この多型性があっても異常スプライス産物は検出されなかったので、これは真の原因変異ではなく、これと連鎖していると予想された。今後、全LPL遺伝子(35kb)の塩基配列を決定し、この多型性と連鎖する真の原因変異を検出する予定である。LPL蛋白低値者であるにも関らず、LPL遺伝子異常ヘテロ接合体が同定されなかった対象者について、他の高TGの要因(肝性リパーゼ遺伝子、apoE、apoCII、apoCIII等)を調べたが、該当するものはなかった(計画[4])。計画[2]の成果に基づいて、再度、アニール温度を低目に設定してPCRをやり直して、PCR-SSCPと直接塩基配列決定を行うと変異が検出できる可能性が高い。以上により、LPL遺伝子診断がより確実となり、また、簡便化され、この成果は、高TG血症の診断と予防に貢献すると考えられる。

Research Products

• [Publications] Takagi A: "A newly identified lipoprotein lipase gene mutation (F270L) causing impairment of both catalytic function and intracellular transport in a Japanese patient with fasting hyperchylomicronemia"Biochimica et Biophysica Acta. 1502. 433-446 (2000)
• [Publications] Ikeda Y: "A compound heterozygote for a novel missense mutation (G105R) in exon 3 and a missense mutation (D204E) in exon 5 of the lipoprotein lipase gene in a Japanese infant with hyperchylomicronemia"Clinical Science. 99(6). 569-578 (2000)
• [Publications] Mori A: "Improved method for direct DNA sequencing of the lipoprotein lipase gene using a DNA autosequencer."Clinical Biochemistry. 33(4). 323-327 (2000)
• [Publications] 高木敦子: "リポ蛋白リパーゼ測定法(活性および酵素蛋白量)In:高脂血症(上巻)"日本臨床. 59(増2). 813-820 (2001)
• [Publications] 池田康行: "肝性トリグリセリドリパーゼ測定法(活性および酵素蛋白量)In:高脂血症(上巻)"日本臨床. 59(増2). 821-826 (2001)
• [Publications] 池田康行: "高脂血症発症・進展にかかわる環境因子In:高脂血症(上巻)"日本臨床. 59(増2). 670-676 (2001)
• [Publications] 池田康行: "家族性リポ蛋白リパーゼ欠損症In:先天異常症候群辞典(黒木良和 編)"日本臨床. (印刷中). (2001)
• [Publications] Ikeda Y: "Novel compound heterozygous mutations for lipoprotein lipase deficiency : a G-to-T transversion at the first position of exon 5 causing G154V missense mutation and a transition in 5'-splice site of intron 8(GT^GC) causing aberrant splicing"J Lipid Res. (in press). (2001)