遺伝子解析による結核菌のピラジナミド感受性試験法の開発

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670404
• Research Institution: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• Principal Investigator: 勝川 千尋 大阪府立公衆衛生研究所, 公衆衛生部, 主任研究員 (20183725)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 定彦 大阪府立公衆衛生研究所, 公衆衛生部, 主任研究員 (90206540)
• Keywords: 結核菌 / ピラジナミド / 薬剤感受性試験 / ピラジナミダーゼ / pncA / ダイレクトシークエンス / 遺伝子変異 / 多剤耐性結核菌

Research Abstract

1、PZA耐性結核菌株の収集およびPZA感受性試験
前年度に収集した結核菌39菌株(PZA耐性菌9株、感受性菌30株)に加え、さらに多くのPZA耐性菌を得るため、PZAが効果を示さない患者より分離され、耐性化していることが推測される17菌株を収集し、従来法(卵培地法、寒天培地法、液体培地法)によるPZA感受性試験を試みた。分離された患者の薬剤使用歴、PZA投与による効果等を総合的に判断し、11株がPZA耐性であると判定された。
2、PZA耐性結核菌の遺伝子変異の検出
収集した全菌株についてピラジナミダーゼ活性の有無とピラジナミダーゼをコードする遺伝子(pncA)の変異を調べた。ピラジナミダーゼ活性は試験管内でピラジナミドからのピラジン酸産生の有無を検査し、遺伝子変異についてはプロモーター領域を含む領域をPCR法により増幅し、ダイレクトシークエンス法により塩基配列の決定を行い、野生株と耐性株を比較し遺伝子の変異を検出した。その結果、PZA耐性菌20株はすべてピラジナミダーゼ活性陰性であり、遺伝子の変異も認められた(プロモーター領域の変異1株、pncAの変異19株)。これに対して感受性株36株はすべてピラジナミダーゼ活性陽性であり、遺伝子の変異も認められなかった。
本年度の結果は、pncAの変異の検出によりPZA耐性の遺伝子診断が可能になることを示した。次年度以降は、さらに迅速な遺伝子変異の検出法を開発していく予定である。

Research Products

• [Publications] Yasuhiko Suzuki: "Study of the Mechanism of Drug Resistance of Mycobacterium tuberculosis and its Application for Rapid Diagnosis."Journal of Antibacterial and Antifungal Agents. 28. 561-573 (2000)
• [Publications] 鈴木定彦: "細菌の化学療法剤と薬剤耐性"臨床と微生物. 28. 35-40 (2001)
• [Publications] 鈴木定彦: "DNAチップによる結核菌の耐性診断"BIO REVIEW. 17. 36-44 (2000)
• [Publications] 鈴木定彦: "結核菌の薬剤耐性と関与遺伝子"Pharma Medica. 18. 47-53 (2000)
• [Publications] 鈴木定彦: "結核および非定形抗酸菌症"Makoto. 110. 2-7 (2000)
• [Publications] 勝川千尋: "DNAチップ応用技術 結核菌の耐性診断"シー エム シー. 200 (2000)