覚醒剤による神経変性過程における細胞内ストレス応答に関する研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670424
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 上村 公一 山口大学, 医学部, 助手 (30244586)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 安原 正博 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60305604) ; 吉田 謙一 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40166947)
• Keywords: 覚醒剤 / アポトーシス / ネクローシス / Protein kinase C / glutamate receptor

Research Abstract

覚醒剤(MAP)はdopamine neuronの変性及び神経細胞死を引き起こすが、細胞死がapoptosisによるかnecrosisによるか、また、Protein Kinase C(PKC)、glutamate receptorの関与について、ラットのphechromocytoma由来のPC12 cellを用い研究を行った。培養液中に、(1)MAPを添加(1,3,5mM)し、経時的に(6,24,48時間後)の生存率をerythocinBを用いた色素排除法で測定した。(2)MAP添加の24時間後にTUNEL染色により、細胞レベルでのDNAの断片化を測定した。(3)Z-VAD-fmk(caspase inhibitor)、PMA(PKC activator)、calphostin C(PKC inhibitor)、bisindolylmaleimide 1(specific PKC inhibitor)、MK-801(NMDA receptor antagonist)を添加し、その直後に3mM MAPを加え、24時間後の生存率を測定した。その結果(1)MAPによりPC12 cellの生存率は容量及び時間依存的に低下し、細胞死が誘導された。(2)MAPの容量依存的にTUNEL陽性細胞が増加した。(3)MAPによる細胞死はZ-VAD-fmkでほぼ完全に抑制されたことにより、細胞死はapoptosis優位と考えられた。また細胞死がPMAで抑制、calphostin C、bisindolylmaleimide 1で促進、MK-801で抑制された。MAPによるapoptosisは、その過程でのPKC活性化及びglutamate receptorの抑制が細胞の生存を促進する。MAPによる細胞死に対するPKCの保護作用はglutamate receptorを介する。