1999 Fiscal Year Annual Research Report
B型肝炎ウイルスX蛋白質と相互作用する新規癌抑制遺伝子産物(XAF-1)の解析
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11670539
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
古坂 明弘 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (00266678)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白木 克哉 三重大学, 医学部, 助手 (90263003)
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| Keywords | 癌抑制遺伝子 / HBx |
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| Research Abstract |
1.XAF-1cDNA full lengthの獲得:HBxと結合する新規蛋白質の同定を目的にYeast Two Hybrid法を用いてスクリーニングを行いHBxと結合する新規蛋白をコードする
2.6Kbの遺伝子をクローニングしこの蛋白をXAF-1と命名した。XAF-1はHeat shock Protein Familyに属し(蛋白レベルでE coli.DnaJ proteinと42%のhomology),Drosophila melanogaster Tid56 geneと遺伝子レベルで57%のホモロジーをもっていた.XAF-1遺伝子は全長2619bp,453アミノ酸をコードし、ヒト各組織に対するノーザンブロッティングではmRNAはubiquitousに発現していた。また各種肝癌培養細胞(HepG2,Hep3B,SKHep1,HLE,Huh7)においてもRT-PCR法にてそのmRNAの発現を確認した。
2.GST-XAF-1 fusion proteinの精製とHBxとの結合確認:GST発現ベクターを用いてGST-XAF-1 fusion proteinを作製、GSTアフィニテイカラムで精製し、in vitroにおけるHBxとXAF-1とのbinding assayによる結合実験を行い結合を確認した.
3.XAF-1mRNA発現の検討:正常ヒト各組織、肝癌培養細胞株(HuH-7,HepG2)におけるmRNAの発現をノーザンブロット法により検討し、サイズを決定した。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] 古坂明弘 等: "新規B型肝炎ウイルスX蛋白質結合蛋白質(XAF-1)のクローニングと解析"日本成人病学会誌. 26. 44 (2000)
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[Publications] Akihiro Furusaka et al: "Identifying a novel human heat-shock protein interacting with Hepatitis B virus X protein"Gastroenterology. 116. A1214 (1999)
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[Publications] 杉本和史 等: "HBx結合蛋白(XAF-1)の遺伝子解析とその機能"肝臓. 40. 182 (1999)
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[Publications] 杉本和史 等: "HBx結合蛋白(XAF-1)の遺伝子解析とその機能"Japanese Journal of Cancer Research. 90. 87 (1999)
