1999 Fiscal Year Annual Research Report

冠攣縮性狭心症の発症機構に関する分子生物学的研究

Research Project

Project/Area Number	11670694
Research Institution	Kumamoto University
Principal Investigator	吉村道博熊本大学, 医学部・附属病院, 助手 (30264295)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	泰江弘文熊本大学, 医学部, 教授 (40174502)
Keywords	冠攣縮 / 狭心症 / 一酸化窒素 / 一酸化窒素合成酵素 / 遺伝子変位 / 転写因子 / アセチルコリン / PCR法
Research Abstract	我々は冠攣縮狭心症例において血管内皮型-酸化窒素合成酵素(eNOS)遺伝子にミスセンスGlu298Asp変異を見出した。さらに、5'側非翻訳'領域に三つの連鎖する点変異群T-786→C,A-922→G,T-1468→Aを発見し、それぞれの変異が対照群より冠攣縮群に有意に多く認めることを明らかにした。luciferase reporter assayにより、5'側非翻訳'領域の3つの変異の内では、T-786→C変異型が転写を抑制していることが明らかとなった。核蛋白質を抽出しgel mobility shift assayを行ったところ、T-786→C変異プローブでのみシフトバンドを認め、同部位に負の転写抑制因子が結合することが示唆された。よって、この転写因子のクローニングを開始したが、その結果、この因子は、replication protein A-1(RPA-1)であることが判明した。ヒトの冠動脈の反応性に関しても、アセチルコリンやISDNに対する反応を比較すると、T-786→C変異の症例は野生型の症例に比較して反応性がより大きいことが判明した。以上より、我々が同定したeNOS遺伝子T-786→C変異は単なるマーカーではなく、eNOS活性に直接影響を及ぼしている可能性が極めて高い。しかしながら、5'非翻訳領域の変異に関して、これが直接的にeNOS蛋白発現を抑制するという証明はまだなされていないのでその検討を開始した。ヒト臍帯静脈(HUVEC)培養系において、そのgenotypeを決定した後、定量的PCR法を用いて、eNOS蛋白の発現の程度を検討している。最近、Real-time detection RT-PCR法によりeNOSのmRNAを定量する系を確立した。この新しいシステムを用いて従来の定量的RT-PCR法よりも高感度で定量性の高い測定を可能にした。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] K.Takaoka et al.: "Comparison of the risk factors for coronary artery spasm with those for organic stenosis in a Japanese Population:role of cigarette smoking."Int J Cardiol. 15・72(2). 121-126 (2000)
[Publications] M.Nakajima et al.: "AT^<-786>→C Mutation in the 5'-flanking region of the endothelial nitric oxide synthase gene is associated with myocardial infarction."Am J Cardiol. (in press). (2000)
[Publications] Y.Moriyama et al.: "The plasma levels of dehydroepiandrosterone sulfate(DHEAs)are decreased in patients with chronic heat failure in proporition to the severity."J Clin Endocrinol Metab. (in press). (2000)
[Publications] M.Yoshimura et al.: "AT^<-786>→C Mutation in the 5'-flanking Region of the Endothelial Nitric Oxide Synthase Gene and Coronary Arterial Vasomotility.q"Am J Cardiol. (in press). (2000)
[Publications] M.Yoshimura et al.: "Genetic risk factors for coronary artery spasm:significance of endothelial nitric oxide synthase gene T_<-786> →C and missense Glu298Asp variants."J Invest Med. (in press). (2000)
[Publications] H.Yasue et al.: "Coronary Artery Disease Axel Springer Japan Publishing."Coronary Artery Disease.Genetic analysis of endothelial nitric oxide synthase in patients with coronary spasm.. 6 (2000)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

冠攣縮性狭心症の発症機構に関する分子生物学的研究

Principal Investigator

吉村 道博 熊本大学, 医学部・附属病院, 助手 (30264295)

Research Products

[Publications] K.Takaoka et al.: "Comparison of the risk factors for coronary artery spasm with those for organic stenosis in a Japanese Population:role of cigarette smoking."Int J Cardiol. 15・72(2). 121-126 (2000)

[Publications] M.Nakajima et al.: "AT^<-786>→C Mutation in the 5'-flanking region of the endothelial nitric oxide synthase gene is associated with myocardial infarction."Am J Cardiol. (in press). (2000)

[Publications] Y.Moriyama et al.: "The plasma levels of dehydroepiandrosterone sulfate(DHEAs)are decreased in patients with chronic heat failure in proporition to the severity."J Clin Endocrinol Metab. (in press). (2000)

[Publications] M.Yoshimura et al.: "AT^<-786>→C Mutation in the 5'-flanking Region of the Endothelial Nitric Oxide Synthase Gene and Coronary Arterial Vasomotility.q"Am J Cardiol. (in press). (2000)

[Publications] M.Yoshimura et al.: "Genetic risk factors for coronary artery spasm:significance of endothelial nitric oxide synthase gene T_<-786> →C and missense Glu298Asp variants."J Invest Med. (in press). (2000)

[Publications] H.Yasue et al.: "Coronary Artery Disease Axel Springer Japan Publishing."Coronary Artery Disease.Genetic analysis of endothelial nitric oxide synthase in patients with coronary spasm.. 6 (2000)

吉村道博熊本大学, 医学部・附属病院, 助手 (30264295)