先天性脱髄モデルにおけるオリゴデンドログリアのアポトーシス死機構の解明

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670761
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 谷池 雅子 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30263289)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 毛利 育子 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 島 雅昭 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (10252660)
• Keywords: twitcher / オリゴデンドログリア / 脱髄 / アポトーシス / TUNEL / TNF-α / ミクログリア

Research Abstract

twitcherは遺伝性脱髄症であるクラッベ病のモデルマウスであり、日令30以降、中枢神経系においてオリゴデンドログリアのアポトーシスによる脱髄が明瞭に認められる。
第2年度はin vitroにおいてオリゴデンドログリアのアポトーシスを誘導することが知られているTNF-αのtwitcherにおける発現と神経病理との対応を調べた。遺伝子診断を行った日令15-45のtwitcher,wild凍結大脳・小脳からRNAを抽出してLight cyclerを用いた定量的RT-PCRにより、mRNA量を解析すると同時に、凍結無固定切片のTNF-α免疫染色、パラフィン切片の一般神経染色、MBP染色等のミエリン染色、TUNEL染色を行い、部位によるTNF-α発現の差異があるかどうか、TNF-α発現と脱髄病変/オリゴデンドログリアのアポトーシス変化との間に関連があるかどうかを調べた。結果は以下の通りである。1)調べたいかなる年令においてもwildでは免疫組織化学にてTNF-α陽性細胞は認めず、mRNA量も1コピー以下/G3PDH 10^5コピーと常に低かった。2)twitcherにおいてはTNF-αの発現量は日令20では大脳においてはwildとの間に差異を認めなかったが、小脳においては日令20においてwildの10倍以上に増加しており、日令30ではwildの40倍以上に著増していた。3)twitcherにおけるTNF-α陽性細胞は特異的レクチンマーカーによる標識より、ミクログリア/マクロファージであることが証明された。TNF-α陽性細胞局在部位は小脳白質・脳幹のアポトーティックなオリゴデンドログリアが多く、脱髄変化が強い部位に一致していた。以上より、twitcherの小脳、脳幹におけるオリゴデンドログリアのアポトーシスがTNF-α経路を介していることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Mason JL et al.: "Mature oligodendrocyte apoptosis precedes IGF-1 production and oligodendrocyte progenitor accumulation and differentiation during demyelination/remyelination"J Neurosci Res. 61(3). 251-62 (2000)
• [Publications] Beuckmann CT et al.: "Cellular localization of lipocalin-type prostaglandin D synthase (beta-trace) in the central nervous system of the adult rat"J Comp Neurol. 428(1). 62-78 (2000)